[发明专利]miR-204及其靶基因在诊断和治疗骨肉瘤中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体地，涉及miR-204及其靶基因在诊断和治疗骨肉瘤中的应用。

背景技术

骨肉瘤（osteosarcoma）是一种最常见的间质肉瘤，主要来源于长骨的干骺端。作为一种恶性程度较高的原发性肿瘤，该肿瘤主要发生于青少年和青年。它的早期诊断不明显，容易发生肺转移，而且预后极差。复发或转移患者的5年生存率为0～30%。因此，寻找在骨肉瘤生长和转移中发挥关键作用的分子，能为该类肿瘤的有效诊疗提供新途径。

MicroRNA（miRNA）是一类由0～22个核苷酸组成的单链非编码RNA分子。miRNA的表达具有很强的时空特异性，广泛存在于真核生物中并且在物种进化中相当保守。相关研究表明：miRNA在细胞周期、增殖、凋亡、分化和发育等生命活动中具有非常重要的调节作用。越来越多的证据表明：miRNA的异常表达与肿瘤的发生、发展和预后密切相关。

miR-204定位于人类9号染色体上73424891～73425000位置之间（GRCh37/hg19），它的成熟体序列（5’-UUCCCUUUGUCAUCCUAUGCCU-3’）在人、鼠、狗、鸡和斑马鱼等脊椎动物中高度保守。miR-204在肿瘤中的相关研究表明：在头颈部鳞状上皮细胞癌、黑色素瘤、子宫内膜癌的细胞株中，过表达的miR-204可以抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。在胆管癌细胞系中，miR-204可以促进癌细胞的凋亡，增加化疗敏感。在胃远端腺癌组织、大肠癌组织、急性髓细胞白血病患者、经典型霍奇金淋巴瘤患者的淋巴结、反应性淋巴结中，miR-204表达明显降低。在前列腺癌、慢性淋巴细胞白血病、急性淋巴白血病、胰岛素瘤中，高表达miR-204促进了这些肿瘤的发生和发展。相关研究还发现，大量的miRNAs在骨肉瘤中异常表达，这些miRNAs的异常表达表明：miRNAs很可能与骨肉瘤发生和转移相关的重要信号通路有关。但是目前现有技术中尚不清楚miR-204在骨肉瘤中的具体功能和作用机理。

发明内容

本发明为了克服现有技术的上述不足，提供了miR-204在调控Runx2基因表达水平中的应用，本发明经研究发现miR-204通过靶向识别调控Runx2基因的表达，从而起到抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移的作用。

本发明的另一目的在于提供miR-204在制备抑制Runx2基因表达水平制剂中的应用。

本发明的另一目的在于提供一种Runx2基因表达抑制剂。

本发明的另一目的在于提供上述Runx2基因表达抑制剂在制备骨肉瘤治疗制剂或药物中的应用。

本发明的另一目的在于提供miR-204在制备通过调控Runx2基因表达水平治疗骨肉瘤的制剂或药物中的应用。

本发明的另一目的在于提供一种通过调控Runx2基因表达水平治疗骨肉瘤的制剂或药物。

本发明的另一目的在于提供一种骨肉瘤诊断试剂盒。

为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：

本发明请求保护miR-204在调控Runx2基因表达水平中的应用。本发明经研究发现，Runx2蛋白在骨肉瘤细胞增殖和迁移的重要信号通路中起到关键作用，而miR-204通过靶向识别调控Runx2基因的表达，使得骨肉瘤细胞中Runx2基因低表达，从而起到抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移的作用。

本发明还请求保护miR-204在制备抑制Runx2基因表达水平制剂中的应用。

一种Runx2基因表达抑制剂，所述抑制剂中包含miR-204。

本发明还请求保护上述Runx2基因表达抑制剂在制备骨肉瘤治疗制剂或药物中的应用。

本发明还请求保护miR-204在制备通过调控Runx2基因表达水平治疗骨肉瘤的制剂或药物中的应用。

一种通过调控Runx2基因表达水平治疗骨肉瘤的制剂或药物，所述制剂或药物中包含miR-204。

本发明经研究发现，在人骨肉瘤细胞系U2OS和人成骨肉瘤MG-63细胞株中过表达miR-204，发现骨肉瘤细胞的相对细胞增殖量显著低于miR-204对照组和未做任何处理组。在人骨肉瘤细胞系U2OS和人成骨肉瘤MG-63细胞株中过表达miR-204，发现骨肉瘤细胞的相对迁移速度显著低于miR-204对照组和未做任何处理组迁移情况。