[发明专利]一种西格列汀中间体的生物合成方法

权利要求书

1.一种西格列汀中间体化合物(R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸的生物合成方法，其特征在于，由4-(2,4,5-三氟苯甲基)尿嘧啶在酶的作用下，经一锅法制备，

所述一锅法中的酶法，所使用的酶为海因水解酶、海因消旋酶和N-甲酰基-D-氨基酸水解酶的混合物。

2.根据权利要求1所述生物合成方法，其特征在于，所述海因水解酶来源于Rhodococcus rhodochrous，Jannaschia sp,Sinorhizobium meliloti,Arthrobacterpolychromogenes,Agrobacterium tumefaciens，Escherichia coli中的一种；所述海因消旋酶来源于Achromobacter obae，Agrobacterium fabrum，microbacteriumliquefaciens，Arthrobacter aurescens,Escherichia coli中的一种；所述N-甲酰基-D-氨基酸水解酶来源于Brevundimonas diminuta，Flavobacteriumsp.Pyrococcushorikoshii，Thermococcus litoralis，Aspergillus melleus，Alcaligenesfaecalis，Pyrococcus horikoshii，micrococcus agilis中的一种。

3.根据权利要求1所述生物合成方法，其特征在于，所使用的酶为基因工程菌全细胞、破碎酶液、冻干粉或固定化酶或固定化细胞。

4.根据权利要求1所述的生物合成方法，其特征在于，所述反应在溶剂存在条件下进行。

5.根据权利要求4所述生物合成方法，其特征在于，所述溶剂为缓冲溶液与有机溶剂组成的混合溶剂。

6.根据权利要求5所述生物合成方法，其特征在于，所述缓冲溶液选自磷酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲溶液、柠檬酸盐缓冲溶液或3-吗啉丙磺酸缓冲溶液中的一种或多种。

7.根据权利要求5所述生物合成方法，其特征在于，所述有机溶剂选自二甲基亚砜、乙酸乙酯、乙酸丁酯、异丙醇、N,N-二甲基甲酰胺、甲基叔丁基醚、二氯甲烷、乙酸乙烯酯中的一种或两种及以上混合。