[发明专利]一种磷脂酶

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种磷脂酶及其应用。所述磷脂酶的最适作用pH值为8.5，最适作用温度为45℃，在4‑50℃水浴中静置1个小时，酶活比较稳定，几乎没有变化，在55‑65℃水浴中静置1小时后仍能保留超过80%的酶活，70℃水浴中静置1小时后仍然能保留超过50%的活力，耐热效果显著。所述磷脂酶可广泛应用于植物油酶法脱胶，脱胶油中残留的磷仅为13.29ppm，脱胶效果好，应用前景广泛。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种磷脂酶及其应用。

背景技术

磷脂酶是生物体内负责磷脂的代谢和生物合成的一类酶，能催化甘油磷脂各种水解反应，根据其水解磷脂位置的不同可分为5类：磷脂酶A1、A2、B、C、D。

磷脂酶的生物功能可归纳为三类：细胞膜结构的维护和修复；细胞内代谢机制和信号传导的调节及体内磷脂的消化。如磷脂酶A2 （PLA2）大量存在于蛇毒、蜂毒、蝎毒、动物胰脏及植物组织中，可介导产生具有磷脂转运、膜修复、胞外水解及神经元转移因子等功能的脂质介质。而磷脂酶C（PLC）在生物的生命活动中起着第二信使的作用，其广泛存在于各种原核、真核生物之中，只是在分子结构上略有差异。

磷脂酶不仅在生物体内具有很重要的生理功能，而且具有很高的应用价值，可广泛地用在科学研究、医药、饲料改良和食品工业等诸多方面。例如在医药方面PLA2被应用于抗炎药物的生产，PLC被应用于抗肿瘤药物的研制等；在饲料改良方面，磷脂酶被添加于饲料中水解甘油磷脂，可改善饲料的利用效率和促进动物生长；在食品工业方面，磷脂酶A1（PLA1）、磷脂酶A2（PLA2）和磷脂酶C（PLC）可被广泛应用于油脂脱胶，同时由于磷脂酶可使面团形成胶状复合体，可以减少淀粉回生，因此在烘焙行业应用也非常广泛。此外磷脂酶D（PLD）还广泛应用于甘油磷脂改性。

磷脂酶普遍存在于动物、植物和微生物中。由于微生物来源的磷脂酶具有种类繁多、多为外泌表达、单亚基蛋白、容易大量快速制备和成本低等特点，已经成为当前食品工业应用的最重要途径。常见的产磷脂酶的微生物主要有产碱假单胞菌(Pseudomonasalcaligenes)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens )、链霉菌( Streptomyces)和米曲霉( Aspergillus oryzae)等。

但是现有野生菌株的磷脂酶生产能力往往很有限，无法满足工业生产的要求。因此，为了适应工业生产过程中高温、高压、高酸度、高离子浓度以及重金属离子超标的极端环境，需要进一步筛选具有改进性能的磷脂酶的新基因。

发明内容

本发明的目的是提供一种来源于曲霉（Aspergillus sp.）的磷脂酶及其重组表达工程菌株。本发明通过构建含有曲霉的磷脂酶基因的表达载体，并将其转化入毕赤酵母中，构建得到毕赤酵母工程菌株，能高效分泌表达磷脂酶。

本发明一方面提供了一种磷脂酶，其特征在于，所述的磷脂酶为

（a）氨基酸序列为SEQ ID NO:1的酶；

（b）在（a）中的氨基酸上发生取代、缺失或添加一个或数个氨基酸得到的，具有磷脂酶活性的酶。

用于编码上述磷脂酶的基因，其中一种编码核苷酸序列为SEQ ID NO:2。

本发明另一方面提供了一种植物油的脱胶方法。

所述方法具体为：将200g植物油在搅拌下加热至70-80℃，添加0.16g 45%柠檬酸溶液，将混合物剪切1分钟，在70-75℃温度下，用磁力搅拌器搅拌30分钟，冷却该油，直至油温为55-65℃，然后添加8%氢氧化钠溶液，将混合物剪切混合30秒，将温度维持在50-55℃，添加5mL含磷脂酶，然后混合剪切1分钟，在温度为50-55℃下，搅拌反应5小时，然后离心该酶处理的油，收集分离的油和湿胶，所得油即为脱胶后的植物油。