[发明专利]一种提高驴精液低温保存品质的精液稀释液及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及畜牧领域，具体公开了一种提高驴精液低温保存品质的精液稀释液及其制备方法与应用。本发明提供的精液稀释液能够显著提高精液低温保存活性，延长精子体外保存时间。本发明提供的应用操作简便，应用成本低廉，效果显著，对动物不产生任何有害影响。可以在驴属动物精液保存及相关的胚胎移植产业和胚胎工程中广泛应用，具有广阔的市场前景。

技术领域

本发明涉及畜牧领域，具体地说，涉及一种提高精液低温保存品质的精液稀释液及其制备方法与应用。

背景技术

精液冷冻保存与人工授精技术相结合，在现代畜牧业生产中发挥着巨大的作用，能大量减少公畜的饲养数量，降低生产成本，提高优秀种公畜的利用率，为畜牧业带来巨大的经济效益。现阶段，驴繁殖主要采用本交方式，个别技术好的畜牧人员有时也将采出的精液(鲜精)不稀释或低倍稀释立即给发情母驴输精，它适用于母驴季节性发情较明显，而且数量较多的地区。精液低温冷冻保存技术能充分利用优良种畜的遗传资源，迅速扩大畜群的良种比例。

与本交相比，效率可提高5～20倍。但由于我国驴品种较多，养殖区分布较广，多在山区或交通不便区域，且饲养方式多以散户居多，母驴分布不集中，鲜精或低倍稀释的精液人工授精技术推广面积较少。此外，由于驴鲜精体外保存时间极短，几小时后活力近乎丧失，这使得驴的鲜精人工授精技术受到时间、地点的极大限制。因此，畜牧生产中迫切需要保存时间更长、携带更为方便的优质公驴精液来改良全社会的驴生产群体。

精液保存分为常温(15℃～25℃)保存、低温保存(0℃～5℃)和冷冻(-79℃～-196℃)保存三种方法。常温保存技术研究开展的最早，相对比较成熟，但在常温下，一方面微生物生长迅速会影响精液质量，另一方面常温保存时精子活力下降较快。低温保存技术相对冷冻保存而言操作简单方便，成本低，但低温保存技术需要既能提供营养又能保护精子的非渗透性低温保护剂及稀释液冷冻保存是指将精液经过特殊处理后置于液氮或干冰中，可保存该物种种质资源数年甚至数十年，切实发挥良种公畜的遗传资源。但由于不同公畜精子的生物学特性不同，其冷冻保存效果也存在很大的差别。如牛精液的冷冻保存技术比较成熟，尤其牛精液细管法程序生产已经普及；但羊精子冻后普遍存在情期受胎率不稳定、受胎率低、重复率低等诸多问题；而猪的精子因含脂量较高，脱水比较困难，冷冻-解冻后精子存在超微结构受到损伤(如精子膜、顶体和精子核泡化、损伤或破裂)、在雌性生殖道内寿命缩短和受精率低等问题，因而猪精液冷冻保存还一直处于试验阶段。目前国内外关于驴精液冷冻保存的研究很少，主要原因是:一方面是驴的繁殖率低，妊娠期长；第二，由于不同的驴个体间其精液品质有明显的差异，且驴精子本身对低温打击特别敏感，在冷冻解冻过程中极易损伤，因而冷藏和冷冻后的精液极大地降低了受胎率；第三，由于驴发情时间长，人工授精的时机掌握不准确造成其妊娠率低；最后，公驴每次平均射精量多达70ml，密度较稀，且精清中的电解质成分会促进精子早衰。因而，驴的冷冻精液生产操作程度复杂，难度大，严重制约着冷冻精液的应用。

近几年，子宫角深部输精和内窥镜输精等低剂量输精技术在生产中应用，进一步对精液的保存效果提出了更高的要求。因此，提高冻精活力，延长精子体外存活时间是畜牧生产和科学研究所必需的。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种提高精液低温保存品质的精液稀释液及其制备方法与应用。

本发明技术方案如下：

一种提高精液低温保存品质的精液稀释液，包括A溶液、脱脂奶和新鲜卵黄；其中，A溶液由以下成分组成：葡萄糖3.5～6.00g、乳糖0.300～2.5g、棉子糖0.300g、柠檬酸钠0.060～0.095g、柠檬酸钾0.082～0.41g、HEPES试剂0.952～1.325g、青霉素10～40万IU、链霉素10～40万IU、蒸馏水100mL；所述A溶液与脱脂奶的体积比为1:1；所述精液稀释液中新鲜卵黄的体积含量为1％～2.5％。