[发明专利]一种基于抑制COX-2活性的中药组合物检测方法

说明书

本发明涉及一种中药组合物的检测方法，该方法以该中药组合物对COX‑2酶的抑制率作为测定指标，检测其抗炎活性。所述方法包括：A)制备中药组合物样品溶液和/或对照品溶液；B)测定样品溶液和对照品溶液对COX‑2酶活力的抑制率；C)以COX‑2酶活力抑制率为指标，计算效价和可信限率。

技术领域

本发明涉及中药组合物的生物检测方法，属于医药领域。

背景技术

目前，中药复方的质量评价仅通过测定单一化学成分来进行，首先，该化学成分是否是复方发挥药效的物质，第二，控制该化学成分的最低含量是否能有效控制其质量的有效性和一致性？从目前的研究来看，仅通过测定单一化学成分对中药复方进行质量评价显然是不行的。因此，如何根据中药复方的具体情况，结合现代科学技术，探索能够符合中医药特点，在一定程度上既关联临床疗效又关联作用机制，具有可操作性的中药复方制剂质量评控方法，保证中药复方临床疗效的一致性和稳定性，是中药研究领域中最重要的课题之一。

生物活性测定指导原则已被《中国药典》收录，并在水蛭等药材的质量控制中采用了生物评价的方法；美国FDA在《植物药研发行业指南》中也明确提出生物评价将作为植物药注册评审的主要内容。可见，生物评价已成为中药及中药复方制剂品质评价的发展方向。对于中药而言，临床应用绝大多数为中药复方，很少存在单一药味使用的情况，其复杂的成分以及多样的药理作用都决定了检测一种或几种活性成分并不能体现其整体药效，仅通过这一标准评价中药是行不通的。将生物评价方法引入中药质量控制体系不仅仅可以鉴定品种，评价质量，还可以与其药效相挂钩，并且观察其毒副作用。在某种程度上来说，利用生物评价方法检测中药的质量较传统化学方法存在着明显的优越性。其中对于中药大复方的分析更能体现其优势。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明提供一种中药组合物的生物检测方法，相对于现有技术仅检测一种或几种活性成分的检测方法，本发明的生物检测方法能更全面的表征中药组合物的整体药效，从而控制其质量。

一种中药组合物的检测方法，该方法包括：将中药组合物制备为可检测的样品，与环氧化酶(COX)接触，测定样品对环氧化酶(COX)的抑制率。

在具体的实施方式中，所述检测方法包括如下步骤：

A)制备中药组合物样品溶液和/或对照品溶液；

B)测定样品溶液和对照品溶液对COX-2酶活力的抑制率；

C)以COX-2酶活力抑制率为指标，计算效价和可信限率；

其中，步骤B测定样品溶液和对照品溶液对COX-2酶活力的抑制率可采用酶免疫法等进行测定。

作为优选的实施方式，可按如下方法测定抑制率：

a)向待测溶液中加入COX-2酶，培养一定时间；

b)向待测溶液中加入ADHP和AA；

c)显色，检测荧光强度；

d)按如下公式计算抑制率，

抑制率％＝(初始活性样品的荧光强度-待测样品的荧光强度)/初始活性样品的荧光强度×100％。

优选的，步骤a中COX-2酶用量为500U/mL～1000U/mL；

优选的，步骤b中AA经过纯化；

优选的，步骤c中荧光强度在激发光波长530-540nm，发射波长585-595nm下检测。