[发明专利]一种人工诱导雌核发育金鱼的体色性状纯种系培育方法

说明书

本发明涉及一种人工诱导雌核发育金鱼的体色性状纯种系培育方法。采用二次注射法进行青灰色的雄鱼鲫鱼催产排精；使用常压室温等离子体的育种仪分批次对精子稀释液进行精子失活处理；得到鲫鱼失活精子液与目标体色的金鱼所产卵粒完成受精；采用秋水仙素结合冷处理方式进行处理金鱼受精卵，雌核发育二倍体化并自然孵化；选择培育得到目标体色性状的F1代金鱼；选择F1代雌性金鱼作为亲鱼，雄性鲫鱼，重复上述步骤得到目标体色性状的F2代金鱼纯种系。采用本发明技术方案得到的目标体色性状的F2代金鱼纯种系亲本用于育种生产，为观赏鱼类目标体色性状的定向培育创建新的快捷途径。

技术领域

本发明技术属于金鱼人工诱导育种技术领域,具体涉及一种人工诱导雌核发育金鱼的体色性状纯种系培育方法。

背景技术

金鱼（ Carassius auratus） 是目前国内观赏鱼市场中最普遍的消费品种，市场上常见的体色有红色、红白、黄色、五花等，但能稳定遗传的品系不多。因此，开展金鱼体色定向发育的遗传研究，不仅大幅度缩短优质品色选育的时间、提高育种效率，还能创造新的经济价值，具有广阔的实用前景。

据研究资料：国外在斑马鱼、孔雀鱼、青鳉鱼、月光鱼及日本锦鲤等海洋鱼类、热带观赏鱼类体色选育研究中成就突出。国内也有学者针对鱼类体色开展了相关研究，如张建森等体色体型遗传研究；徐伟等杂交子代的体色和鳞被遗传特性研究；王成辉的体色遗传与变异研究等等。目前，绝大部分仍通过人工调控鱼类体色定向发育以获得特定体色的鱼类，其方法有：遗传因素调控、内分泌因素调控、营养因素调控、着色物质调控、环境控制等。此外，大量研究结果表明，只有纯种系品种体色才能获得稳定的遗传。

如何稳定保持优良金鱼的观赏体色性状已成为观赏金鱼的遗传育种中亟待解决的问题。以雌核发育方法建立金鱼遗传纯系，可以快速选育出观赏体色性状稳定的金鱼纯种系，繁殖出大量具有优良观赏体色性状的金鱼以满足人们的需求，以实现观赏鱼类目标体色性状的定向培育。

发明内容

本发明采用常压室温等离子体育种仪( AＲTP)进行鲫鱼精子灭活处理,其与所选择体色形状雌性金鱼卵受精, 采用秋水仙素结合冷处理方式，人工诱导金鱼雌核发育二倍体化，通过目标体色形状金鱼鉴定筛选，选育获得建立目标体色性状的金鱼纯种系，为观赏鱼类目标体色性状的定向培育创建新的快捷途径。

为实现本发明目的而采用技术方案如下：

1、精子失活处理

采用体色为青灰色的雄性鲫鱼, 采用二次注射法进行催产排精，第一次用2μg促黄体素释放激素类似物（LHＲH－A2）预备针注射雄性亲鱼；16小时后，按照每kg鱼重注射3～5mg复配催熟剂进行第二次注射。按常规采集鲫鱼精子液,使用40～50倍数的Hank's液进行稀释,得到精子稀释液。

所述的复配催熟剂，其配方为每10mg复配催熟剂中含有2mg地欧酮（DOM）、6mg 鲤鱼脑垂体（PG）、800国际单位IU人绒毛膜促性腺激素（HCG）。

利用常压室温等离子体的育种仪( AＲTP)分批次对精子稀释液进行精子失活处理，多批次合并后鲫鱼失活精子液总量300μL以上。

精子失活处理后每20μL失活精子液中加入5μL 0.6M 甘露醇、10μL Hank's 液， -2～4℃低温避光保存备用。

所述的精子失活处理，其条件为:精子稀释液上样量20μL，处理输出功率125 W，气体流速10 L·min^{－ 1}，辐照距离2 mm，处理时间为20～60 s。

2、受精