[发明专利]一种人工诱导雌核发育金鱼的体色性状纯种系培育方法

权利要求书

1.一种人工诱导雌核发育金鱼的体色性状纯种系培育方法,其特征在于：

1)精子失活处理

采用体色为青灰色的雄鱼鲫鱼,第一次用2μg促黄体素释放激素类似物预备针注射雄性鲫鱼；16小时后，按照每kg鱼重注射3～5mg复配催熟剂进行第二次注射，采集鲫鱼精子液,使用40～50倍数的Hank's液进行稀释,得到精子稀释液；

利用常压室温等离子体的育种仪分批次对精子稀释液进行精子失活处理，合并后鲫鱼失活精子液总量300μL以上；精子失活处理后每20μL失活精子液中加入5μL 0.6M甘露醇、10μLHank's 液，在-2～4℃低温避光保存备用；

2）受精

在一洁净2L陶瓷盆中，倒入0.5L～1L鱼类生理盐水，在陶瓷盆底面放置鱼巢，然后挑选2～4 龄不同于鲫鱼体色产卵期的雌性金鱼，所述挑选2～4 龄不同于鲫鱼体色即为子代筛选的目标体色，按雌性金鱼每kg体重注射鲤鱼脑垂体3～4mg比例进行人工催产，之后用手挤净雌性金鱼卵粒于鱼类生理盐水中，同时在挤出的金鱼卵粒周围，倒入200μL低温保存鲫鱼失活精子液，并用羽毛在水中轻轻搅动，使精卵在水中完成受精并粘附在鱼巢上；

3）雌核发育二倍体化和孵化

在孵化缸中倒入1升浓度为40～60ppm秋水仙素水溶液，并降温至-1～3℃温度，再将受精后金鱼卵浸泡在-1～3℃秋水仙素水溶液中，浸泡时间为20～30分钟，浸泡后移至24℃水温的孵化池进行雌核发育二倍体化后自然孵化；

4）目标体色性状F1代金鱼筛选

在孵化池中选择弃去青灰色的个体，保留下的原有目标体色性状雌核发育的F1代金鱼个体；

5）建立目标体色性状的F1代金鱼

将目标体色雌核发育的F1代金鱼苗移入育苗池,在生长发育过程中，不断剔除掉孵化后生长发育过程呈现出一些表达出有害隐性基因控制的性状的个体鱼苗以及因亲本性状不佳而产生畸型或损伤鱼苗，保留目标体色雌核发育的金鱼苗，继续培育到2～4龄，得到目标体色性状的F1代金鱼个体；

6）目标体色F2代金鱼纯种系的培育

选择目标体色性状的 F1代雌性金鱼作为亲鱼，雄鱼采用体色为青灰色的鲫鱼，重复1）-5）的步骤，得到目标体色性状的F2代金鱼纯种系。

2.根据权利要求1所述的一种人工诱导雌核发育金鱼的体色性状纯种系培育方法，其特征在于所述的复配催熟剂，其配方为每10mg复配催熟剂中含有2mg地欧酮、6mg 鲤鱼脑垂体、800国际单位IU人绒毛膜促性腺激素。

3.根据权利要求1所述的一种人工诱导雌核发育金鱼的体色性状纯种系培育方法，其特征在于所述的精子失活处理，其条件为:精子稀释液上样量20μL，处理输出功率125 W，气体流速10 L·min^{－ 1}，辐照距离2 mm，处理时间为20～60 s。

4.根据权利要求1所述的一种人工诱导雌核发育金鱼的体色性状纯种系培育方法，其特征在于所述的鱼类生理盐水配方为：NaCl 15 g、KCl 0.3g、CaCl₂ 0.6g、10μL 0.6M 三磷酸腺苷、纯净水20g，pH为7.0。