[发明专利]一种载氧药物的电泳分离方法

说明书

本发明涉及的是一种载氧药物的电泳分离方法，其特征在于它包括以下步骤：采用SDS‑PAGA实验方法，分离胶浓度为8‑12％、pH8.8，浓缩胶浓度为3‑5％、pH6.8、电极缓冲液为Tris‑甘氨酸缓冲液，pH为8.3；上样后接打开电泳仪进行电泳过程，待溴酚蓝接近凝胶底部时，关闭电源结束电泳；用考马斯亮蓝G250染色液染色，用7％冰醋酸脱色。电泳得到的谱图结果显示，聚合血红蛋白样品条带清晰整齐、背景浅、分辨率高，可达到较好的分离效果。

(一)技术领域：

本发明涉及生物医药领域，特别是一种载氧药物的电泳分离方法

(二)背景技术：

血红蛋白类载氧药物为现阶段载氧药物研究的重点，由于载氧药物的半径小，约是红细胞半径的1/400-1/1000，易通过阻塞毛细血管，通过体循环及时的运输氧到缺血组织，对患者进行有效的治疗抢救。

1967年Shapiro发现SDS-聚丙烯酰胺分离蛋白分子原理后，其成为分离纯化蛋白质中非常有效的一种简便方法。在测定蛋白质亚基分子量方面，是蛋白质化学中利用蛋白质大小的最重要的一种分离技术

载氧药物是用戊二醛对血红蛋白进行不定向交联制得，其分子量分布及平均分子量的测定对于对于血红蛋白类载氧药物质量控制就显得至关重要。聚丙烯酰胺凝胶电泳可以将不同的分子按分子量大小进行分离，所以，本文对血红蛋白类载氧药物的进行电泳分离，为载氧药物的平均分子量测定提供了一个有效的方法。

(三)发明内容：

本发明的目的在于提供一种载氧药物的电泳分离方法，它针对上述情况，发明一种操作简便、成本低廉、高效的载氧药物电泳分离方法。

本发明的技术方案：载氧药物电泳分离方法，其特征在于它包括以下步骤：

1、采用SDS-PAGA实验方法应在15℃-25℃进行，分离胶浓度为8-12％、pH8.8，浓缩胶浓度为3-5％、pH6.8、电极缓冲液为Tris-甘氨酸缓冲液，pH为8.3。

2、上样载氧药物的浓度为0.03％-1％(g/100mL)，上样后接通电泳仪正负极，开启电源进行电泳过程，样品在浓缩胶中时电流为10mA，样品进入分离胶后电流为30mA，待溴酚蓝接近凝胶底部时，关闭电源结束电泳。

3、用考马斯亮蓝G250染色液染色20分钟，将染好色的凝胶捞出用清水洗净后，用7％冰醋酸脱色24小时以上，中间每隔2小时更换一次脱色液。电泳得到的谱图结果显示，聚合血红蛋白样品条带清晰整齐、背景浅、分辨率高，可达到较好的分离效果。

(四)具体实施方式：

以下将通过具体实施方式的形式再对本发明的上述内容做进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅局限于以下的具体实施方式，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1 凝胶的配置

分离胶的制备：用小烧杯配制10mL10％的分离胶液，边加边摇匀。注意尽量减少SDS因为摇晃而形成气泡。用胶头滴管吸取分离胶液加至玻璃板之间，大概加到玻璃板的2/3，剩下1/3用来制备浓缩胶。由于两种胶之间的界面需要粘合，制备分离胶后需要用蒸馏水进行水封，等到30分钟后分离胶凝好之后再倒去蒸馏水。残留的水分会影响浓缩胶的浓度，需要用滤纸条在玻璃板的端口吸去多余水分。切勿将过滤纸伸入两块玻璃板之间，否则纸会污染玻璃板，影响制胶的质量。

浓缩胶的制备：用小烧杯配制5mL3％分离胶，注意边加边摇匀。不要剧烈摇动，因为SDS会产生气泡。之后用胶头滴管将浓缩胶液注入玻璃板之间，然后缓慢的将样品梳子插入浓缩胶内。注意不要让样品梳或者凝胶周围有气泡，否则会影响下一步的上样量以及电泳的迁移率。约30min凝胶即可聚合好。

实施例2 上样