[发明专利]一种南极磷虾β-蜕皮激素的提取及高效液相检测方法

说明书

本发明公开了一种南极磷虾β‑蜕皮激素的提取及高效液相检测方法，以新鲜冷冻南极磷虾为材料，进行解冻和组织剪碎处理，用甲醇超声提取，正己烷去脂，并在‑20℃条件下冷冻去掉其他杂质，得到含β‑蜕皮激素的提取物，南极磷虾β‑蜕皮激素的检测采用高效液相的检测方法，条件为UV/Visible检测器，YMC‑PACK ODS‑A250×4.6mml.D.S色谱柱，流动相甲醇‑水，等度洗脱，检测波长248nm，并用Breeze软件跟踪并积分峰面积，得到南极磷虾中β‑蜕皮激素的含量，该操作方法简单、快速，结果准确、可靠。

技术领域

本发明涉及一种南极磷虾β-蜕皮激素的提取及高效液相检测方法，属于食品和化工技术领域。

背景技术

β-蜕皮激素，又名β-蜕皮甾酮、20-羟基蜕皮甾酮；分子式为C₂₇H₄₄O₇，分子量为480.63道尔顿，是一种淡黄色结晶粉末。在动植物体内，β-蜕皮激素参与蜕皮、生殖、寿命、滞育及免疫应答等众多方面的调节，对维持基本的生理功能具有重要作用。β-蜕皮激素作用于人体可以促进细胞的生长分裂，加速胶原蛋白的合成，刺激真皮细胞分裂，促进皮肤再生。同时大量的动物实验证明，β-蜕皮激素能够排除体内胆固醇，促进蛋白质、碳水化合物、脂质代谢，具有显著的降血脂和降血糖的功效，能够保护神经系统、肝脏和心血管系统，是一种重要的天然抗癌制剂。

南极磷虾(Euphausia superba)，主要生活在南极洲的南冰洋水域，是南极洲生态系统的重点物种，为鲸鱼、海豹、企鹅等提供了重要的食物来源。南极磷虾储量巨大，并多以群居方式生活，易采集捕捞。南极磷虾含有丰富的脂类和高质量的蛋白质，具有巨大的应用价值。目前，对于南极磷虾的应用主要集中于作为鱼类饵料以及加工磷虾油保健产品。因此，若以南极磷虾为原料，开发天然激素类药物，对于增加利用价值，具有广阔的应用前景。

β-蜕皮激素系在露水草中首次发现，因其在植物中含量丰富，目前对于β-蜕皮激素的研究植物中较多，对于植物中β-蜕皮激素的提取多采用水煮联合乙醇提取，并经柱层析或石油醚脱脂提纯，提取步骤复杂，耗时长；而对于植物中β-蜕皮激素的检测，目前有薄层扫描法、放射免疫测定法、液相色谱法等，如CN103837615A公开了一种应用高效液相色谱法同时测定植物蜕皮激素类物质的方法，许栗榕公开了露水草β-蜕皮甾酮的提取、纯化工艺及其质量标准研究，王强等公开了19种资源植物中β-蜕皮激素的含量测定(薄层层析和高效液相)，但所述方法仍存在前处理较为繁琐、样品用量大、结果准确性低等缺点。动物中的β-蜕皮激素在昆虫和甲壳动物十足目的报道较多，多采用取动物血清或淋巴液，再经多次提取，纯化，并用配置的溶解液溶解，进行酶联免疫检测或高效液相、液相色谱-串联质谱法检测，如赵鹏等公开了高效液相色谱-三重四级杆质谱分析海洋甲壳动物淋巴和肌肉中的20-羟基蜕皮酮的研究，但其操作较为复杂，现有检测中酶联免疫价格昂贵，耗时较长。

目前尚未有关于从南极磷虾中提取β-蜕皮激素的方法及分析检测的报道。

发明内容

针对上述现有技术存在的问题，本发明的目的之一在于提供一种操作简单、提取充分、除杂良好的南极磷虾β-蜕皮激素的提取方法。

本发明的另一目的在于提供一种简单、快速、准确、可靠的南极磷虾β-蜕皮激素的检测方法。

为实现上述目的，具体的，本发明采用以下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种南极磷虾β-蜕皮激素的提取方法，步骤如下：

(1)取冷冻南极磷虾解冻，并将其进行组织剪碎处理；

(2)取剪碎的南极磷虾和甲醇混合进行超声提取，过滤提取液，收集滤液；

(3)将滤液旋转蒸发，得到β-蜕皮激素的粗提物；

(4)将粗提物用甲醇完全溶解，加入等体积的正己烷，混匀，离心，弃去上清；