[发明专利]一种南极磷虾β-蜕皮激素的提取及高效液相检测方法

权利要求书

1.一种南极磷虾β-蜕皮激素的提取方法，其特征在于，步骤如下：

(1)取冷冻南极磷虾解冻，并将其进行组织剪碎处理；

(2)取剪碎的南极磷虾和甲醇混合进行超声提取，过滤提取液，收集滤液；

(3)将滤液旋转蒸发，得到β-蜕皮激素的粗提物；

(4)将粗提物用甲醇完全溶解，加入等体积的正己烷，混匀，离心，弃去上清；

(5)将步骤(4)离心后的下层液体进行冷冻处理，析出白色沉淀后，吸取上清，弃去沉淀，将上清液旋转蒸发后有机滤膜过滤，获得南极磷虾β-蜕皮激素提取物；

所述步骤(2)中取剪碎的南极磷虾和甲醇以W/V为1g：5-8ml的比例混合进行超声提取；

所述步骤(3)中将滤液在旋转蒸发仪中蒸发至干，旋蒸温度为45-55℃，得到β-蜕皮激素的粗提物；

所述步骤(4)中，将粗提物用甲醇完全溶解，加入等体积的正己烷，超声混匀，2800-3200rpm，4℃条件下离心25-35min，弃去上清，重复三次；

所述步骤(5)中，将下层液体放入-20℃冰箱，析出白色沉淀后，吸取上清，弃去沉淀，将上清液旋转蒸发至一定体积，用0.22μm的有机滤膜过滤，作为样品液备用。

2.根据权利要求1所述的一种南极磷虾β-蜕皮激素的提取方法，其特征在于，经冷冻处理的南极磷虾冷冻处理的温度为-45℃～-80℃。

3.根据权利要求1所述的一种南极磷虾β-蜕皮激素的提取方法，其特征在于，步骤(1)为：取冷冻南极磷虾，在5％生理盐水中解冻，解冻时间2-4h，将解冻处理的南极磷虾吸干水分，并将其进行组织剪碎处理。

4.根据权利要求1所述的一种南极磷虾β-蜕皮激素的提取方法，其特征在于，步骤(2)中超声提取的条件为:30℃-38℃、250-350W、30-50kHz的条件下超声提取1-2h。

5.根据权利要求4所述的一种南极磷虾β-蜕皮激素的提取方法，其特征在于，超声提取的条件为：35℃、300W、40kHz的条件下超声提取1h。

6.根据权利要求1所述的一种南极磷虾β-蜕皮激素的提取方法，其特征在于，步骤(3)中将滤液在旋转蒸发仪中蒸发至干，旋蒸温度为50℃。

7.根据权利要求1所述的一种南极磷虾β-蜕皮激素的提取方法，其特征在于，步骤(4)中超声混匀条件为，25-35℃，250-350w，40kHz。

8.根据权利要求7所述的一种南极磷虾β-蜕皮激素的提取方法，其特征在于，超声混匀条件为35℃，300w，40kHz。

9.一种南极磷虾中β-蜕皮激素的检测方法，其特征在于，

采用权利要求1-6任一项提取方法中步骤(1)-(5)提取南极磷虾β-蜕皮激素；此外还包括如下步骤：

(6)以步骤(5)获得的南极磷虾β-蜕皮激素提取物作为样品液，称取β-蜕皮激素标准品溶于甲醇制备标准品液；

(7)采用高效液相色谱检测标准品液和样品液，高效液相色谱的检测条件为：紫外/可见光检测器，YMC-PACK ODS-A 250×4.6mml.D.S-5μm.12nm色谱柱，流动相为甲醇-水，检测波长248nm；

(8)通过软件进行高效液相峰面积定量，得到样品中β-蜕皮激素的浓度。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，高效液相色谱的检测条件为：Waters1525 BianaryHPLC泵，Waters 2489 UV/Visible检测器。

11.根据权利要求10所述的检测方法，其特征在于，步骤(6)中，精密称取1.0000mgβ-蜕皮激素标准品溶于1.0ml甲醇，得浓度为1.0mg/ml的标准液。

12.根据权利要求10所述的检测方法，其特征在于，步骤(7)中，流动相为甲醇：水＝40:60，流速：1ml/min，等度洗脱。