[发明专利]治疗糖尿病创面注射剂的制备方法及其产品

说明书

本发明公开了一种治疗糖尿病创面注射剂的制备方法及其产品，其包括以下步骤：1)含有间充质干细胞的溶液；2)制备I型胶原蛋白溶液和层粘连蛋白的混合溶液；3)混合溶液与含有间充质干细胞的溶液进行混合，并充分分散均匀，即得治疗糖尿病创面注射剂。本发明其主要是通过I型胶原蛋白和层粘连蛋白对间充质干细胞的包覆，保护间充质干细胞的活性，从而避免在治疗过程中随着时间推移，治疗效果减弱的问题，而且I型胶原蛋白和层粘连蛋白可以与间充质干细胞起到协同作用，进一步增强其治疗效果。

技术领域

本发明属于医药技术领域，特别涉及一种治疗糖尿病创面注射剂的制备方法及其产品。

背景技术

创面愈合是一个复杂的生物学过程，是炎性细胞、修复细胞、细胞外基质及细胞因子等多因素共同参与并高度协调、相互调控的复杂过程。糖尿病患者皮肤易受损伤，损伤后往往反复发作，迁延不愈，形成顽固难愈性溃疡，这主要是因为糖尿病患者机体的组织细胞长时间处于高糖环境，使局部皮肤组织细胞、蛋白质等被糖基化，引起血管内皮功能异常，反应受损；巨噬细胞的功能异常，炎症反应延长失衡；生长因子缺乏或者受损，明胶组织的减少、表皮屏障功能的失调，以及肉芽组织的减少等，导致溃疡难以修复。随着居民生活水平的提高，饮食结构的改变、日趋紧张的生活节奏以及少动多坐的生活方式等诸多因素，糖尿病发病率及患病率增长迅速，因此，糖尿病难愈性溃疡的治疗是临床急需解决的重要课题之一。

目前治疗糖尿溃疡的方法有传统外科清创、高压氧治疗、植皮治疗法、生长因子治疗等。近年来，随着组织工程学研究的不断深入，采用干细胞治疗糖尿病溃疡取得了一定的效果。目前干细胞治疗方法主要有动脉、静脉或局部注射细胞，在细胞迁移过程中，存在着细胞存活率低、细胞凋亡、功能障碍的问题。间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)，因其来源广泛、取材容易、免疫原性小等特点，是目前治疗糖尿病难愈性创面最常用的细胞。MSCs具有向各种组织相比分化的巨大潜能，可通过免疫调节及其旁分泌能力，促进血管生成、改善糖尿病创面糖脂代谢，具有改变糖尿病局部的微环境能力，为糖尿病难愈性创面的治疗提供了有力的手段。虽然间充质干细胞治疗糖尿病难愈性创面虽然取得了一些疗效，但单一MSCs细胞进行静脉或局部注射后，细胞在迁移过程中，会存在细胞存活率下降，活性减弱，因而随着时间的推移其治疗效果会减弱，导致糖尿病难愈性创面后期愈合效果较差。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗效果好的治疗糖尿病创面注射剂的制备方法及其产品。

本发明提供的治疗糖尿病创面注射剂的制备方法，包括以下步骤：

1)将脐带间充质干细胞在培养皿中培养，用胰蛋白酶进行消化，消化完后添加血清去除胰蛋白酶的活性，接着进行第一次离心，离心完毕后倒掉上清液，然后用PBS溶液重悬细胞，进行第二次离心，离心完毕后倒掉上清液，再添加PBS溶液重悬细胞，得到含有间充质干细胞的溶液；

2)取I型胶原蛋白溶解于醋酸水溶液，得到I型胶原蛋白溶液；取层粘连蛋白溶解于PBS溶液溶解，得到层粘连蛋白溶液；将I型胶原蛋白溶液和层粘连蛋白溶液进行混合，得到混合溶液；

3)在步骤2)的混合溶液中加入步骤1)制备的含有间充质干细胞的溶液，并用微量移液器轻轻反复吹打，至间充质干细胞充分分散均匀，即得治疗糖尿病创面注射剂。

所述步骤1)中，细胞培养至6-8代；消化时间为1-3min，胰蛋白酶的质量分数为0.1％-0.5％；含有间充质干细胞的溶液浓度为5×10⁶-2×10⁷个/ml；

所述步骤2)中，醋酸水溶液的质量体积比为0.1-1.0％；I型胶原蛋白溶液的浓度为50-200ug/ml；层粘连蛋白溶液的浓度为25-100ug/ml；I型胶原蛋白溶液与层粘连蛋白溶液的混合体积比为1:(1-2)。

所述步骤3)中，混合溶液与间充质干细胞的溶液的混合体积比为1:(1-4)。