[发明专利]一种藻毒素及其提取纯化方法

说明书

本发明提供了一种藻毒素及其提取纯化方法。该藻毒素的提取纯化方法包括以下步骤：步骤一：采用质量浓度为60wt％的甲醇溶液溶解蓝藻干粉，超声振荡后形成藻浆，然后离心沉降，分离出上层清液和残渣；步骤二：向所述残渣中加入质量浓度为60wt％的甲醇溶液溶解，然后磁力搅拌并超声振荡形成藻浆，随后离心沉降，再次分离出上层清液和残渣，将本步骤获得的上层清液与步骤一获得的上层清液混合，形成粗提液；步骤三：重复所述步骤二2次以上，然后调节所述粗提液的pH值去除蛋白质，再经过滤、除甲醇后得到提取液；步骤四：将所述提取液经滤膜初步过滤后采用固相萃取柱进行富集浓缩和洗脱，保护气吹干后得到藻毒素。

技术领域

本发明属于化学领域，涉及一种藻毒素及其提取纯化方法。

技术背景

近年来由水体富营养化导致的蓝藻水华污染已引起全球关注。蓝藻水华污染所带来的主要危害是有毒蓝藻向水体中释放多种不同类型的微囊藻毒素(microcystis,MCs)，其中微囊藻毒素MC-LR和MCRR是我国富营养化水体中最主要的两种藻毒素。MCs是一种公认的肝毒素和促癌剂，长期饮用含有MCs的水会对人的肝脏造成损伤，极端情况下会危及到人的生命。目前藻毒素纯品仅有美日德等少数几家公司可提供，价格昂贵，许多基于藻毒素的研究工作无法深入开展。这种背景下，研制开发一种藻毒素提取纯化的技术成为急需解决的问题。

发明内容

鉴于上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种藻毒素及其提取纯化方法。该提取纯化方法适于毫克级微囊藻毒素的制备，制得作为标准样品的藻毒素。

为了达到前述的发明目的，本发明提供一种藻毒素的提取纯化方法，其包括以下步骤：

步骤一：采用质量浓度为60wt％的甲醇溶液溶解蓝藻干粉，超声振荡后形成藻浆，然后离心沉降，分离出上层清液和残渣；

步骤二：向所述残渣中加入质量浓度为60wt％的甲醇溶液溶解，然后磁力搅拌并超声振荡形成藻浆，随后离心沉降，再次分离出上层清液和残渣，将本步骤获得的上层清液与步骤一获得的上层清液混合，形成粗提液；

步骤三：重复所述步骤二2次以上，然后调节所述粗提液的pH值去除蛋白质，再经过滤、除甲醇后得到提取液；

步骤四：将所述提取液经滤膜初步过滤后采用固相萃取柱进行富集浓缩和洗脱，保护气吹干后得到藻毒素。

上述藻毒素的提取纯化方法中，离心沉降的转速≥12000r·min^-1。上述藻毒素的提取纯化方法以收获于野外的水华蓝藻的干粉为原料，从中提取高纯度的微囊藻毒素具有效率高，投资少，安全性高，纯度高，对环境无污染等优点；通过采用调节粗提液的pH值至藻胆蛋白等电点的方法除去粗提液中大量存在的藻胆蛋白，简单有效，并取得了很好的纯化效果。所提纯得到的微囊藻毒素的纯度经HPLC-UV/DAD检测可达90％以上，因此，上述藻毒素的提取纯化方法提纯得到的微囊藻毒素可做标准样品。

根据本发明的具体实施例，优选地，所述蓝藻干粉包括水华蓝藻制得的干粉。

根据本发明的具体实施例，优选地，所述步骤三中，采用砂芯漏斗进行过滤。

根据本发明的具体实施例，优选地，所述步骤三中，所述除甲醇的步骤为：在40℃下，采用真空旋转蒸发去除甲醇，得到所述提取液。

根据本发明的具体实施例，优选地，所述步骤四中，所述滤膜的孔径为0.45μm以下。

根据本发明的具体实施例，优选地，所述步骤四中，在进行富集浓缩和洗脱前，依次采用纯甲醇和超纯水将所述固相萃取柱进行活化。

根据本发明的具体实施例，优选地，所述步骤四中，所述富集浓缩的流速为4mL·min^-1。