[发明专利]一种微藻类胡萝卜素成分的含量测定方法

说明书

本发明涉及一种微藻类胡萝卜素成分的含量测定方法，即采用基质分散固相萃取前处理、高效液相色谱法在同一色谱条件下对微藻中3种分别为游离的岩藻黄素、虾青素、叶黄素的类胡萝卜素成分同时进行含量测定。本发明包括如下步骤：1)称取0.1‑5g反相固相萃取填料及与填料质量比为1:2‑1:20的微藻粉末于玛瑙或玻璃研砵中，研磨；2)将研磨均匀的混合物装入带有聚四氟垫片的空SPE管中，用体积比100％～70％的水‑甲醇淋洗，有机溶剂洗脱；3)洗脱液浓缩定容后采用高效液相色谱分析。该方法具有简单快速、试剂用量少、结果准确可靠、稳定性好等特点，适用于微藻中游离类胡萝卜素成分的定性、定量分析。

技术领域

本发明涉及一种微藻中类胡萝卜素成分的含量测定方法。其特征在于：采用基质分散固相萃取前处理、高效液相色谱法在同一色谱条件下对微藻中3种分别为游离的岩藻黄素、虾青素、叶黄素的类胡萝卜素成分同时进行含量测定。该方法具有简单快速、试剂用量少、结果准确可靠、稳定性好等特点，适用于微藻中游离类胡萝卜素成分的定性、定量分析。

技术背景

类胡萝卜素是一类天然存在的脂溶性色素，普遍存在于藻类、植物、真菌和细菌中，它不仅是一种很好的食品添加剂，而且广泛应用于化妆品、保健品等。人和动物不能合成类胡萝卜素，均需通过食物获取。类胡萝卜素对人体具有多种生物学功能，可对一些疾病起到预防和治疗作用，可以降低罹患许多慢性病的风险(李兵等，分析测试学报，2015，第34卷，第7期，813-818)。近年来，人工合成类胡萝卜素的生物学效应和安全性备受质疑，微藻作为天然类胡萝卜素的最佳来源受到人们广泛的关注(许颖颖等，食品工业科技，2016，第37卷，第3期，373-379)。

海洋微藻作为海洋的初级生产者和海洋生物种属的主体，在海洋生态系统的物质循环和能量流动中起着重要作用。微藻为单细胞光合生物，可通过光合作用捕获空气中的CO2，大部分转化成各类含碳的功能分子单元，包括糖、蛋白、氨基酸、脂质等(W.Gross.Valuable products from biotechnology of microalgae.Microbialbiotechnology,2004,635～648；姚领。硕士学位论文，天津商业大学，海洋微藻抗菌活性藻株筛选及其活性物质分离纯化研究。2007，第1页)。其中脂类化合物可以占到生物量总碳的5～20％(孙书勤。硕士学位论文，中国海洋大学，海洋微藻中脂类生物标记物在天然海水中降解行为的研究。2009，第2页)，相比连接有氮、氧等杂原子的蛋白质、糖类等分子，是连续碳原子数最多的“高级单体分子”。而微藻独特的生存环境和原始地位也赋予其多种新颖独特的具有生物活性的脂质代谢产物。其中从微藻中提取类胡萝卜素具有明显的优势：如，微藻生长迅速，易培养，适于大规模养殖；微藻代谢合成的类胡萝卜素种类很多，如β-胡萝卜素、叶黄素、虾青素等，这些类胡萝卜素的生物活性和抗氧化性已被证实。因此，研究开发微藻中的类胡萝卜素，既可扩大天然类胡萝卜素来源，又可提高藻种的利用价值。

目前，类胡萝卜素多采用有机溶剂提取，这种方法所用溶剂量较大、花费时间较长。超临界流体萃取、甲素溶剂萃取、逆流色谱等手段也逐渐应用到类胡萝卜素的提取中，但这些方法对仪器依赖较大，成本较高。基质分散固相萃取法(MSPD)集研磨、提取、净化于一体，本发明采用该方法，结合高效液相色谱分析，可以高效率的分离分析微藻中的类胡萝卜素类化合物。

发明内容

本发明涉及一种微藻类胡萝卜素成分的含量测定方法。其特征在于：采用基质分散固相萃取前处理、高效液相色谱法在同一色谱条件下对微藻中3种分别为游离的岩藻黄素、虾青素、叶黄素的类胡萝卜素成分同时进行含量测定。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

1)称取0.1-5g反相固相萃取填料及与填料质量比为1:2-1:20的微藻粉末于玛瑙或玻璃研砵中，充分研磨；

2)将研磨均匀的混合物装入带有聚四氟垫片的空SPE管中，用体积比100％～70％的水-甲醇淋洗，有机溶剂洗脱；