[发明专利]一种人胎盘羊膜和绒毛膜的冷冻保护液及其制备方法在审
申请号: | 201711241799.3 | 申请日: | 2017-11-30 |
公开(公告)号: | CN109845723A | 公开(公告)日: | 2019-06-07 |
发明(设计)人: | 董明珠;李霞云;潘新;刘世红;卢家堃 | 申请(专利权)人: | 北京世纪劲得生物技术有限公司 |
主分类号: | A01N1/02 | 分类号: | A01N1/02 |
代理公司: | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人: | 王玉松;怀春颖 |
地址: | 101200 北京市平*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 冷冻保护液 人胎盘 绒毛膜 羊膜 十二烷基氨基丙酸钠 卵磷脂 卡波姆 微球 制备 长期保存 混合物 重量份 冻存 细胞 | ||
1.一种人胎盘羊膜和绒毛膜的冷冻保护液,其特征在于,所述冷冻保护液主要由下列重量份数的组分组成:
2.如权利要求1所述的人胎盘羊膜和绒毛膜的冷冻保护液,其特征在于,所述卡波姆微球是由如下重量份数成分制备而成:
磷脂酰丝氨酸 2.5-4.3
卡波姆 0.5-0.8。
3.如权利要求2所述的人胎盘羊膜和绒毛膜的冷冻保护液,其特征在于,所述卡波姆微球是通过如下方法制备得到的:将3/4重量份的卡波姆溶于2重量份的水中,制得卡波姆水溶液;将1/4重量份的卡波姆和磷脂酰丝氨酸加入液体石蜡中混合均匀形成油相,将卡波姆水溶液加入到油相中,经剪切机乳化,静置分层,去除液体石蜡,洗涤,干燥,即得卡波姆微球。
4.如权利要求1所述的人胎盘羊膜和绒毛膜的冷冻保护液,其特征在于,所述冷冻保护液中还包括重量份数为0.2-0.5份的月桂酰乙二醇胺和1-2.5份的甘氨酸钠。
5.如权利要求3所述的人胎盘羊膜和绒毛膜的冷冻保护液,其特征在于,所述冷冻保护液主要由下列重量份数的组分组成:
6.一种权利要求1所述的人胎盘羊膜和绒毛膜的冷冻保护液的制备方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
S1:卡波姆微球的制备:
将3/4重量份的卡波姆溶于2重量份的水中,制得卡波姆水溶液;将1/4重量份的卡波姆和磷脂酰丝氨酸加入液体石蜡中混合均匀形成油相,将卡波姆水溶液加入到油相中,经剪切机乳化,静置分层,去除液体石蜡,洗涤,干燥,即得卡波姆微球;
S2:将十二烷基氨基丙酸钠、卡波姆微球和卵磷脂置于研钵中研磨,获得研磨混合物,将研磨混合物和卵磷脂溶于DMSO中,即得冷冻保护液。
7.如权利要求6所述的制备方法,其特征在于,卡波姆微球和液体石蜡的重量份数比为3-5.1:18-32。
8.如权利要求6所述的制备方法,其特征在于,剪切机乳化的具体条件为:第一次乳化速度2500rpm,时间5min,静置1min;第二次乳化速度4500rpm,时间5min,静置5min;第三次乳化5000rpm,时间10min。
9.如权利要求6所述的制备方法,其特征在于,研磨的具体步骤为:将十二烷基氨基丙酸钠溶于2倍重量的水中,置于研钵内研磨5min,研磨速度500rpm,加入1/3重量份的卡波姆微球和2/3重量份的卵磷脂,继续研磨10min,研磨速度300rpm,加入2/3重量份的卡波姆微球,继续研磨10min,研磨速度200rpm,再加入1/3重量份的卵磷脂,研磨10min,研磨速度500rpm,获得研磨混合物。
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