[发明专利]基于唾液蛋白质组学的慢性肾炎生物标志物检测的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物标志物检测方法，具体是一种基于唾液蛋白质组学的慢性肾炎生 物标志物检测的方法。

背景技术

肾炎是肾脏的炎症，可能包括肾小球、肾小管间质，或肾小球和肾小管周围组织，由 免疫介导的、炎症介质(如补体、细胞因子、活性氧等)参与的，最后导致肾固有组织发 生炎性改变，引起不同程度肾功能减退的一组肾脏疾病，可由多种病因引起，在慢性过程 中也有非免疫、非炎症机制参与。如何诊断肾病,并进行早期干预是临床上迫切需要解决 的问题。生物标志物的检测可以实现肾病的早期诊断、患者的预后诊断评估和患者对治疗 的反应。目前，肾炎的生物标志物主要以检测尿液中的尿蛋白以及相关的蛋白组学分析为 主。尿微量白蛋白，人脂质运载蛋白2，胱抑素C，β微球蛋白等在尿液中的含量检测已 经成为评价肾脏疾病的主要标志物。但这些标志物在尿液中能够检测到时，肾脏已经发生 了损伤，对早期诊断，从而进行相应的治疗干预帮助不大。寻找新的生物标志物，使得能 够早期诊断肾炎，意义重大。由于尿液中的蛋白质与肾脏功能息息相关，尿液中的蛋白质 发生改变，表明肾脏已经发生了损伤，因此，在尿液中找肾炎的生物标志物，没有实际意 义。唾液是人体及其他哺乳动物一种重要且必需的体液,近年,成为除血浆、血清、尿液以 外另一种检测人体生理、病理状态的有效工具。唾液主要由腮腺、舌下腺、下颌下腺三对 大唾液腺和大量口腔黏膜下的小唾液腺分泌，并含有部分非唾液腺来源成分,主要包括龈 沟液、口腔固有菌群及其产物、上呼吸道分泌物、口腔屏障渗透而来的血浆及血细胞、脱 落的口腔上皮细胞以及食物残渣等。安静状态下唾液成分主要来源于舌下腺和颌下腺,而 刺激状态下则主要由腮腺分泌的唾液组成。唾液因其取材方便，无痛苦等特性已被广泛用 于生物标志物的研究。在唾液中寻找肾炎的生物标志物，有可能实现肾炎的早期诊断，以 及对肾炎患者的预后评估有促进作用。

随着人类基因组计划(human genomic project，HGP)的完成，人们逐渐将研究靶向转 变对蛋白质组(proteome)的研究。蛋白质组一词是在1994年由Williams和Wilkins提出， 指基因组编码的所有蛋白质，即某一物种、个体、器官、组织乃至细胞的全部蛋白质，强 调基因组对应的所有蛋白质构成的整体。2001年，Nature和Science在公布人类基因组草 图的同时，分别发表了Abbott和Fields的评述与展望。随之，蛋白质组学的地位提升到了 前所未有的高度，被认为是功能基因组学前沿研究战略的制高点、决胜点。蛋白质组学 (proteomics)是一种新兴的科学研究技术，其有别于传统的单个基因或单个蛋白的研究模 式，而是从整体水平分析机体或细胞全部蛋白质组成成分、表达、修饰、结构功能和相互 作用，以及蛋白质和核酸之间的相互作用，对生命的复杂活动有全面和本质的认识，从整 体层次上对蛋白质进行动态研究。

蛋白质是生命活动的执行者，是基因表达的产物，其表达、修饰、功能以及彼此相互 作用均受到遗传及环境因素的影响，于是机体出现疾病状态必然会引起蛋白质含量或者存 在形式的变化，这些变化的蛋白质分子可以为临床疾病诊断的物质基础提供依据。蛋白质 组学主要是运用现代先进的检测技术，检测机体从小到一个细胞到大至整个机体的全部基 因所表达的蛋白质的特性，比较分析生理或病理状态、用药及不用药状态下的差异表达蛋 白质，找出不同状态下个体表达差异的蛋白质，从而为生命的物质基础、疾病的早期检测 与诊断等研究寻找分子诊断标志物提供依据。

近年来，随着现代科学及生物化学的微量检测分析技术的发展创新，唾液作为一种临 床容易采集而且操作过程完全没有创伤性的体液逐渐进入了人们研究活动的视角，且具有 无法估计的科研潜力以及临床应用前景。首先，相比血清标本而言，唾液标本的采集更安 全，具有无创性，采集过程中患者无痛苦，易于接受，而且无血源性疾病传播的风险存在； 与尿液标本相比，唾液标本具有可实时采样、更方便的优点。此外，唾液检测需要的样本 量小、成本低、易于储存和运输。最重要的是，唾液标本成分与血液、尿液等体液成分具 有极高的相似性，对疾病诊断具有极强的敏感性和特异性。