[发明专利]一种直接应用的间充质干细胞冻存液及其制备方法

权利要求书

1.一种直接应用的间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述冻存液主要由下列重量份数的组分组成：

2.如权利要求1所述的直接应用的间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述聚乙二醇微球是由如下重量份数成分制备而成：

聚乙二醇400 2.8-3.5

壳聚糖 0.5-1.2。

3.如权利要求2所述的直接应用的间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述聚乙二醇微球是通过如下方法制备得到的：配置浓度为15.4g/mL的壳聚糖水溶液；将聚乙二醇400加入液体石蜡中混合均匀形成油相，将壳聚糖水溶液加入到油相中，经剪切机乳化，然后加入交联剂，室温搅拌发生交联反应1-2h，静置分层，去除液体石蜡，洗涤，干燥，即得聚乙二醇微球。

4.如权利要求1所述的直接应用的间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述冻存液中还包括重量份数为2-3份的吐温80和0.5-1份的月桂酰谷氨酸钠。

5.如权利要求3所述的直接应用的间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述冻存液主要由下列重量份数的组分组成：

6.一种权利要求1所述的直接应用的间充质干细胞冻存液的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

S1：聚乙二醇微球的制备：

配置浓度为15.4g/mL的壳聚糖水溶液；将聚乙二醇400加入液体石蜡中混合均匀形成油相，将壳聚糖水溶液加入到油相中，经剪切机乳化，然后加入交联剂，室温搅拌发生交联反应1-2h，静置分层，去除液体石蜡，洗涤，干燥，即得聚乙二醇微球；

S2：将淀粉甘醇酸钠和聚乙二醇微球置于研钵中研磨，获得研磨混合物，将研磨混合物溶于生理盐水和甘油的混合物中，即得冻存液。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，聚乙二醇微球和液体石蜡的重量份数比为3.3-4.7：20-30。

8.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，剪切机乳化的具体条件为：第一次乳化速度5000rpm，时间7.5min，静置2.5min；第二次乳化速度2500rpm，时间20min，静置4min；第三次乳化1500rpm，时间7.5min。

9.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述交联剂为过氧化氢二异丙苯。

10.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，研磨的具体步骤为：将淀粉甘醇酸钠溶于2.5倍重量的水中，置于研钵内研磨5min，研磨速度300rpm，加入1/3重量份的聚乙二醇微球，继续研磨，研磨速度200rpm，继续研磨至含水量小于20％水总重量，加入2/3重量份的聚乙二醇微球，研磨速度500rpm，继续研磨10min，研磨速度100rpm，研磨3min，获得研磨混合物。