[发明专利]一种蕙兰的组培快繁方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种蕙兰的组培快繁方法。

【背景技术】

蕙兰为地生草本植物；有着不明显的假鳞茎，叶有5-8枚，呈带形，直立性比较强，长约25-80厘米左右，宽度在7-12毫米，基部常对折呈V形，叶脉比较透亮，边缘常有粗状锯齿；蕙兰是中国栽培最久和最普及的兰花之一，是国家二级重点保护野生物种，是比较耐寒的兰花品种之一。长期以来，蕙兰以分株繁殖为主，分株繁殖速度较慢。想要在短时间内得到更多的植株，可以利用组织培养的方式繁殖。

目前，国内外对蕙兰组织培养进行了许多研究，蕙兰组织培养程序一般为：(1)选取种子或茎尖做外植体；(2)诱导形成原球茎；(3)原球茎大量增殖；(4)分化出小植株；(5)生根壮苗；(6)温室移栽。但种子无菌播种法繁殖出的种苗变异较多，种苗生长不一致，而取茎尖作为外植体对母株有一定的伤害。花梗芽作为外植体已经在一些兰花品种上得到了实践，而蕙兰的花梗芽在组培方面还没有得到利用。由于每个兰花品种在习性上有其自身的特点，在对蕙兰花梗芽外植体进行组培时，采用现有的外植体消毒方式、采用普通的培养基进行组培，仍不能取得满意的组培效果，致使繁殖周期长，增值率低，所得组培苗的质量不好。

【发明内容】

本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种蕙兰的组培快繁方法，本发明的方法以蕙兰的花梗芽作为外植体进行组培繁殖，采用对外植体伤害小的植物消毒液进行消毒，且采用本发明提供的培养基进行组培，可显著提高蕙兰的诱导分化率、外植体增殖系数及生根率，缩短培养周期，提高蕙兰组培苗的质量。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种蕙兰的组培快繁方法，包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养，具体步骤为：

(1)外植体的消毒：以正在开花、生长健壮、无病虫害的蕙兰作为母本，切取母本花梗上的花梗芽作为外植体，首先用流水冲洗花梗芽，再用体积浓度为75％的酒精浸泡1-2min，随后将花梗芽表面的苞叶剥去，接着在植物消毒液中浸泡8min-15min后继续剥去一层苞叶，随后在所述植物消毒液中继续浸泡5-10min，用无菌水3-5次，得消毒后的外植体；所述植物消毒液由以下重量份的原料混合制成：甘草酸0.05-0.08份，石榴皮提取物0.8-1.2份，鱼腥草提取物0.5-0.8份，OP-10 2-4份，水75-100份；

(2)诱导培养：将所述消毒后的外植体的两端切口，将外植体接种在诱导培养基中进行培养，培养时间为45-48天，培养温度18-21℃，光照时间为10-14h/d，光照强度为1500-2000lx；所述诱导培养基为：VW+3-5mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+0.2-0.4mg/L激动素+40-55g/L黄秋葵汁+30-40g/L桑叶汁+8-12mg/L半胱氨酸+20-25g/L蔗糖+6-8g/L琼脂，pH为5.4-5.6；

(3)继代培养：将诱导培养所萌发的小芽，自基部剥离后，接种到继代培养基上，培养温度18-21℃，光照时间为12-14h/d，光照强度为1500-2000lx；

(4)壮苗培养：继代增殖培养4-6代后，选择高2cm以上、外植体上有明显突起的小苗转入壮苗培养基中培养，培养温度18-21℃，光照时间为12-14h/d，光照强度为2500lx，培养至根数为3-5条，叶片3-4片，苗高4-8cm，即可炼苗，炼苗后得到可以移栽的蕙兰幼苗。

较优地，所述继代培养基的组成为：Miller+0.8-1.2mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+2-4mg/L激动素+40-55g/L黄秋葵汁+30-40g/L桑叶汁+8-12mg/L半胱氨酸+20-25g/L蔗糖+6-8g/L琼脂，pH为5.6-5.8。

较优地，所述壮苗培养基的组成为：Miller+0.3-0.6mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+3-5mg/L6-BA+40-55g/L黄秋葵汁+30-40g/L桑叶汁+5-8mg/L半胱氨酸+20-25g/L蔗糖+6-8g/L琼脂，pH为5.4-5.6。

较优地，所述鱼腥草提取物的提取方法为：将新鲜鱼腥草用8-10倍量的水煎煮2次，每次1.5-2h，合并提取液，过滤浓缩至干。

较优地，所述黄秋葵汁的制备方法是：先洗净表皮然后用打浆机打成浆状，再用纱布过滤，所述滤液即为黄秋葵汁。