[发明专利]一种蕙兰的组培快繁方法

权利要求书

1.一种蕙兰的组培快繁方法，包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养，其特征在于具体步骤为：

(1)外植体的消毒：以正在开花、生长健壮、无病虫害的蕙兰作为母本，切取母本花梗上的花梗芽作为外植体，首先用流水冲洗花梗芽，再用体积浓度为75％的酒精浸泡1min-2min，随后将花梗芽表面的苞叶剥去，接着在植物消毒液中浸泡8min-15min后继续剥去一层苞叶，随后在所述植物消毒液中继续浸泡5min-10min，用无菌水3-5次，得消毒后的外植体；所述植物消毒液由以下重量份的原料混合制成：甘草酸0.05-0.08份，石榴皮提取物0.8-1.2份，鱼腥草提取物0.5-0.8份，OP-10 2-4份，水75-100份；

(2)诱导培养：将所述消毒后的外植体的两端切口，将外植体接种在诱导培养基中进行培养，培养时间为45-48天，培养温度18-21℃，光照时间为10-14h/d，光照强度为1500-2000lx；所述诱导培养基为：VW+3-5mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+0.2-0.4mg/L激动素+40-55g/L黄秋葵汁+30-40g/L桑叶汁+8-12mg/L半胱氨酸+20-25g/L蔗糖+6-8g/L琼脂，pH为5.4-5.6；

(3)继代培养：将诱导培养所萌发的小芽自基部剥离后，接种到继代培养基上，培养温度18-21℃，光照时间为12-14h/d，光照强度为1500-2000lx；

(4)壮苗培养：继代增殖培养4-6代后，选择高2cm以上、外植体上有明显突起的小芽苗转入壮苗培养基中培养，培养温度18-21℃，光照时间为12-14h/d，光照强度为2500lx，培养至根数为3-5条，叶片3-4片，苗高4-8cm，即可炼苗，炼苗后得到可以移栽的蕙兰幼苗。

2.根据权利要求1所述的蕙兰的组培快繁方法，其特征在于：所述继代培养基的组成为：Miller+0.8-1.2mg/L2,4-二氯苯氧乙酸+2-4mg/L激动素+40-55g/L黄秋葵汁+30-40g/L桑叶汁+8-12mg/L半胱氨酸+20-25g/L蔗糖+6-8g/L琼脂，pH为5.6-5.8。

3.根据权利要求1所述的蕙兰的组培快繁方法，其特征在于：所述壮苗培养基的组成为：Miller+0.3-0.6mg/L2,4-二氯苯氧乙酸+3-5mg/L 6-BA+40-55g/L黄秋葵汁+30-40g/L桑叶汁+5-8mg/L半胱氨酸+20-25g/L蔗糖+6-8g/L琼脂，pH为5.4-5.6。

4.根据权利要求1所述的蕙兰的组培快繁方法，其特征在于：所述鱼腥草提取物的提取方法为：将新鲜鱼腥草用8-10倍量的水煎煮2次，每次1.5-2h，合并提取液，过滤浓缩至干。

5.根据权利要求1所述的蕙兰的组培快繁方法，其特征在于：所述黄秋葵汁的制备方法是：先洗净表皮然后用打浆机打成浆状，再用纱布过滤，所述滤液即为黄秋葵汁。

6.根据权利要求1所述的蕙兰的组培快繁方法，其特征在于：所述石榴皮提取物通过以下方法得到：先将石榴皮烘干，制成石榴粉，按照固液比为1g：50-60ml用体积浓度为60-70％的乙醇加热回流提取二次，过滤，减压回收乙醇，减压浓缩得醇提物；加水配制成浓度为9-12mg/ml、pH值为5-6的醇提物溶液，上大孔吸附树脂柱，加水洗涤，然后用体积浓度为40-50％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，得流浸膏，真空干燥即得石榴皮提取物。