[发明专利]一种特异性识别肿瘤细胞内microRNA的诊疗一体化给药系统的制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别是一种特异性识别肿瘤细胞内microRNA的诊疗一体化给药系统的制备方法与应用。

背景技术

肿瘤是严重威胁人类健康的一种疾病。目前对肿瘤的主要治疗方法有外科手术、化学治疗和放射治疗。癌症的如何治疗一直以来都是医学界非常重视的问题，化疗是癌症治疗中不可缺少的重要方法之一，但是，一般的化疗药物普遍存在水溶性低，细胞摄取率低，副作用多，靶向性差等。提高癌症治愈率是治疗的关键。提高癌症治愈率的关键因素是早发现，早诊断，早治疗以及肿瘤的特异性靶向治疗。近年来，肿瘤的早期诊断和高效治疗成为研究热点。

目前临床上主要使用MRI、CT成像技术诊断肿瘤，且需联合使用，为增加成像性，还需要使用成像剂。造影剂本身不产生信号，通过影响体内局部组织中水质子弛豫时间而改变信号强度，与周围组织形成对比而产生造影作用。MRI常使用的成像剂是钆喷葡胺，碘海醇是CT成像剂的金标准，这两种成像剂成像能力强，患者可耐受。但患者需两次注射成像剂，且这两种成像剂半衰期短，靶向性差，毒副作用明显。因此作用于人体的MRI造影剂除了要克服以上缺点之外，还应该有水溶性好，弛豫率高等优点。

化疗药物在肿瘤部位的特异性分布直接决定着化疗治疗的效果和其毒副作用，因此大量研究集中在如何将化疗药物高效的转运至肿瘤组织，大量的研究主要集中在肿瘤组织的微环境方面，主要包括温度、pH、化学成分和酶浓度。但是这些差异并不是很明显，因此需要有效的内源性刺激响应特定的系统，特别是肿瘤组织异常表达的生物分子可以控制药物释放。microRNA是调节各种细胞中基因表达的非编码RNA，特别是在癌症发生，发展，和转移中，与其正常组织对应物相比，肿瘤细胞表现出明显的microRNA表达量，为癌症诊断提供新的生物标志物，为癌症的治疗提供新的特异性靶点。

现代医学的一个关键目标就是靶向治疗干预，然而大多数药物缺乏选择性，导致“脱靶”副作用，脱靶药物，特别是在抗癌药物的情况下，会对正常组织和器官造成严重的副作用，为了满足“靶向治疗”的要求，DNA被用作新的靶向配体，特异性强、免疫原性低、易于合成、重现性好、易修饰、组织穿透无毒、快速，但如何将靶点(microRNA)与DNA特异性结合来控制药物释放与对肿瘤的实时监测相结合，实现肿瘤诊疗一体化，并且可以监测药物在生物体内的分布，主动靶向肿瘤组织，增加肿瘤组织中的药物浓度，有效降低化疗药物的毒副作用，但至今未见有该技术的公开报导。

发明内容

针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明的目的就是提供一种特异性识别肿瘤细胞内microRNA的诊疗一体化给药系统的制备方法与应用，可有效解决现有技术中化疗药物靶向递送性差，毒副作用大，肿瘤影像学成像分辨率低的问题。

本发明解决的技术方案是，包括以下步骤：

（1）制备IONP纳米粒子：

取100-200mL蒸馏水，加入 4-6g FeCl₃·6H₂O和2-3g FeCl₂·4H₂O，220-240rpm转速下搅拌，加热到65-75℃，保持8-12min，加入5-10mL体积浓度28％的氨水溶液，再保持28-32min，再加入0.5-1mL油酸，反应2-6h，水洗至pH值至7.0，再用无水乙醇洗涤2-3次，真空干燥，得IONP纳米粒子；

（2）制备IONP@SiO ₂纳米粒子：

将步骤（1）制备的IONP纳米粒子分散在氯仿中，IONP的含量为0.05-0.20g/mL，超声28-32min，得IONP氯仿分散液；取0.20-0.30g十六烷基三甲基溴化铵分散在8-12mL水中，完全溶解，加入0.8-1.2mL IONP氯仿分散液，超声分散均匀，200-240rpm转速下搅拌，升温到55-65℃，蒸发25-35min，使氯仿完全蒸发，得到IONP的水分散液；再将IONP水分散液滴加进含有80-90mL H₂O和0.5-0.8mL浓度为2M的NaOH中，200-240rpm转速下搅拌，升温到35-45℃，稳定8-12min，加入2.0-4.0mL 正硅酸乙酯和10mL乙酸乙酯， 600rpm转速下搅拌lmin，再在200-240rpm转速下搅拌6-10h，先水洗3次，再乙醇洗3次，真空干燥，得到IONP@SiO ₂纳米粒子；

（3）制备IONP@SiO₂-CL：