[发明专利]一种基于超高效液相色谱检测筛选高产麦角固醇红曲菌的方法在审
| 申请号： | 201711238247.7 | 申请日： | 2017-11-30 |
| 公开（公告）号： | CN108226320A | 公开（公告）日： | 2018-06-29 |
| 发明（设计）人： | 何坤;邵彦春 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/06 |
| 代理公司： | 武汉开元知识产权代理有限公司 42104 | 代理人： | 徐绍新 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 固醇 红曲菌 检测 超高效液相色谱 色谱条件 筛选 高产 紫外可见光检测器 检测器 发酵产物 样品处理 分离度 灵敏度 流动相 色谱柱 波长 基线 峰形 进样 菌株 乙睛 图谱 对称 | ||
1.一种基于超高效液相色谱检测筛选高产麦角固醇红曲菌的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)标准曲线的制备：称取100mg麦角固醇标准品用无水乙醇溶解并定容至100mL，作标准储备液，用标准储备液分别配制1，5，10，40，80，100，200，400，800mg/L九份标准液，在色谱条件下进样，以峰面积对标准液浓度做回归曲线，得到回归方程；
(2)样品检测：称取红曲菌发酵样品，经预处理后，在色谱条件下进样，根据得到的峰面积计算浓度，
所述色谱条件为：色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18(2.1×100mm，1.7um)；流动相：乙睛：水＝95：5；流速：0.3ml/min；检测器：紫外可见光检测器；检测波长：282nm；运行时间：10min；进样体积2μL。
2.如权利要求1所述基于超高效液相色谱检测筛选高产麦角固醇红曲菌的方法，其特征在于，所述样品预处理方法是：精密称取烘干粉碎的红曲菌发酵样品0.50g于圆底烧瓶中，加入16mL 25％氢氧化钠-乙醇水溶液，85℃皂化1.5h，补加4mL无水乙醇继续皂化1h，冷却至室温加10mL乙醚，振荡30s，静置萃取30min，重复2次；取上层萃取液水洗至中性，将乙醚全部蒸干，用无水乙醇定容至25mL，样品经0.22μm尼龙膜过滤。
3.如权利要求2所述基于超高效液相色谱检测筛选高产麦角固醇红曲菌的方法，其特征在于：所述25％氢氧化钠-乙醇水溶液，是将25g氢氧化钠溶于40mL去离子水后，用无水乙醇定容至100mL。
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