[发明专利]一种2型糖尿病脾虚证唾液蛋白标记物的检测方法

说明书

本发明公开了一种2型糖尿病脾虚证唾液蛋白标记物的检测方法，具体步骤如下：样品蛋白提取；采用Brad ford法测定提取的蛋白浓度；蛋白酶解；iTRAQ标记；真空冷冻离心干燥；高pH条件下的反相色谱分离；ABI‑5600进行蛋白质分析；质谱数据分析：在选择数据库时，若为已经测序生物，直接选用该物种数据库，若为非测序生物，则选择与被测样品最为相关的大类蛋白质组数据库；采用ABI‑5600型质谱仪进行iTRAQ的质谱分析。本发明能够快速、可靠的蛋白质组学技术方案来发现糖尿病脾虚中的特异性蛋白标记物，为糖尿病脾虚早期诊治、术后复发、转移及预后观察建立一种无创、简便、快捷实用的检测评估手段。

技术领域

本发明涉及一种生物标志物检测方法，具体是一种2型糖尿病脾虚证唾液蛋白标记物的检测方法。

背景技术

2型糖尿病(Type 2diabetes mellitus，T2DM)是临床常见的老年代谢紊乱性疾病，生化检查主要表现为患者空腹血糖及(或者)餐后血糖的升高，症状典型者可以同时伴有口干多饮、多食易饥、尿量增多以及体重减轻等表现，在病程后期，患者多出现心、脑、肾等组织器官的血管粥样硬化性病变，导致血管管腔狭窄，从而引起一系列心、脑、肾等组织器官供血不足、代谢障碍甚至衰竭的临床表现。病情危重者，则由于碳水化合物、脂肪、蛋白质等物质代谢严重失常，或者胰岛素使用不当，血糖在短时间内急剧飙升，引起患者出现病情危重的状态，例如糖尿病酮症酸中毒昏迷(DKA)、高血糖高渗性昏迷，倘若抢救不及时，患者多有生命危险。此外，2型糖尿病的致残率极高，有的老年性患者因为血糖反复或持续性升高，出现了白内障、青光眼、失明、尿毒症，甚至肢体坏疽、截肢等严重不良后果，严重影响患者生活质量，增加社会经济负担。目前，随着人们现在生活水平的提高、平均寿命年龄的延长、人口的老龄化以及人们饮食习惯的西方化，我国的2型糖尿病患者人口总数已经高居于世界首位，而且处于快速增长的阶段，与此同时，我国2型糖尿病患者的患病年龄日趋于年轻化，形势非常严峻。

机体胰岛素分泌相对不足(胰岛素缺乏)和(或)胰岛素的生物效应降低(胰岛素抵抗)是2型糖尿病患者血糖持续性居高不下的重要原因，是2型糖尿病发病的主要机制。为了更好的防治2型糖尿病，减少或者阻止2型糖尿病的并发症出现，目前已经对其发病机制进行更深层次的研究。例如患者胰岛素分泌或功能减退，除了与体型肥胖、运动过少等环境因素有关外，也跟基因等遗传因素有关，其中基因核转录因子7类似物2(transcriptionfactor 7-like 2，TCF7L2)是引起2型糖尿病最重要的一个遗传基因，它除了可以通过直接影响β细胞的生长、分化以及功能来干扰胰岛素的分泌，也可以通过间接的引起胰岛功能的缺陷，从而引起血糖的异常。随着科学的进步，人们对2型糖尿病的研究逐渐由基因转向基因表达的蛋白质研究，例如有人发现2型糖尿病患者跟正常人比较，存在唾液激素原转化酶(Prohormone convertase，PC)含量明显偏低的现象，这种酶是一种内切蛋白酶，能够对神经内分泌激素的前身进行加工，而且能够作用于胰岛β细胞，使其分泌的胰岛素原去除部分肽段形成胰岛素，其含量的降低则可以导致胰岛素的形成不足，从而引起血糖升高。

中医将2型糖尿病归属于“消渴病”范畴，对其有深刻的认识及理解，并创立各具特色的流派及治疗学说，如肾虚论、脾虚论、阴虚燥热论，及从脾论治，从肝论治等。中医药理论治疗2型糖尿病，确实可以提高机体对胰岛素的敏感性，缩减西药的毒副作用及使用剂量，延缓甚至能够有效地防止糖尿病并发症的发生与发展。但是，实际生活中，中医药诊断治疗2型糖尿病并不能够得到很好的重视及广泛运用，其主要的原因就是2型糖尿病的辨证分型方法太过于繁多，缺少可靠的客观性的量化性指标，从而在相当大的程度上影响中医药治疗2型糖尿病的可行性以及具体操作性。因此，要提升2型糖尿病的中医药理论发展，必要先着手2型糖尿病的中医辨证论治理论的现代研究发展。随着现代医学技术的快速发展，运用中西医结合诊治手段研究中医药理论成为一种必然趋势，本课题研究从宏观辨证与微观辨证相结合的思想理念出发，运用唾液蛋白质组学技术探讨2型糖尿病不同证候的微观物质变化，尝试开展2型糖尿病的“病”与“证”相结合的研究，为2型糖尿病临床辨证分型的规范化、客观化提供分子物质基础依据，以期将来能够促进中医药对2型糖尿病的诊断与治疗。