[发明专利]一种NAD类似物的还原方法

权利要求书

1.一种NAD类似物的还原方法，其特征在于：以甲酸化合物为还原剂，可利用甲酸化合物的酶为催化剂，在pH5–8的缓冲体系中，10–40℃下，反应2–120min，获得还原型NAD类似物；

所述可利用甲酸化合物的酶为天然的或经过基因工程突变的酶；可利用甲酸化合物的酶为来源于Candida boidinii的甲酸脱氢酶cboFDH的突变体、来源于Pseudomonas sp.101的甲酸脱氢酶pseFDH、来源于Pseudomonas sp.101的甲酸脱氢酶pseFDH的突变体中的一种或两种以上，其中，甲酸脱氢酶cboFDH为EMBL AJ011046.2，甲酸脱氢酶pseFDH为NCBIP33160.3；

所述甲酸脱氢酶cboFDH的突变体为cboFDH-G171Y、cboFDH-I170T/A229S；所述甲酸脱氢酶pseFDH的突变体为pseFDH-H223S/L257R；

所述的NAD类似物为NCD、NFCD、NClCD、NBrCD、NMeCD、NGD、NTD和NUD中的一种或两种以上，它们的化学结构如下：

所述可利用甲酸化合物的酶表达在微生物的细胞内，而NAD类似物及甲酸化合物进入细胞，NAD类似物还原反应在细胞内进行。

2.按照权利要求1所述的还原方法，其特征还在于：所述甲酸化合物为甲酸、甲酸盐、氘代甲酸、氘代甲酸盐中的一种或两种以上的任意比组合。

3. 按照权利要求1所述的还原方法，其特征还在于：缓冲体系中甲酸脱氢酶的终浓度为4μg/mL-500μg/mL、NAD类似物的终浓度为0.01mM-20mM、甲酸化合物的终浓度为0.4mM -25mM，所述的缓冲体系为磷酸缓冲液，Tris-HCl缓冲液，HEPES缓冲液，MES缓冲液，PIPES缓冲液中的一种或两种以上。

4.按照权利要求1所述的还原方法，其特征还在于： NAD类似物还原得到的还原态产物，可被其他酶用作辅酶应用于还原反应，所述其他酶为下述中的一种或两种以上：催化丙酮酸还原为苹果酸的苹果酸酶ME-L310R/Q401C、催化丙酮酸还原为乳酸的乳酸脱氢酶DLDH-V152R、催化乙醛还原为乙醇的酿酒酵母醇脱氢酶。

5.按照权利要求1或4所述的还原方法，其特征还在于：还原型NAD类似物为ME-L310R/Q401C，DLDH-V152R或酿酒酵母醇脱氢酶提供还原型辅酶时，采用pH5–8的缓冲体系，反应温度10-40℃。

6. 按照权利要求1 所述的还原方法，其特征还在于：所述微生物为大肠杆菌，乳酸乳球菌、酿酒酵母或里氏木霉。