[发明专利]一种检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留的方法

说明书

技术领域

本发明属于检测技术领域，尤其涉及一种检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留的方法。

背景技术

氟喹诺酮类药物(Fluoroquinolones,FQNs)是一类人工合成抗菌药，抗菌效果极强，其中，恩诺沙星(Enrofloxacin,ENR)、环丙沙星(Ciprofloxacin,CIP)、达氟沙星(Danofloxacin,DAO)和沙拉沙星(Sarafloxacin,SAR)在畜禽生产中被广泛应用。FQNs使用不当导致的药物残留及潜在的致癌性，严重威胁着人体健康，联合国粮农组织、欧盟和我国等均规定了动物源性食品中FQNs残留量，FQNs残留引起的问题也越来越受到关注。我国检测鸡蛋中FQNs残留最常采用的方法是农业部781号公告-6-2006-《鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留量的测定-高效液相色谱法》，结合荧光检测器使用。荧光检测器的抗干扰能力相对较弱，对样品前处理和色谱分离条件要求高，分析时间较长，能同时检测氟喹诺酮类药物种类较少；氟喹诺酮类药物性质不稳定，容易降解，此法提取量较低(反复两次提取液共4mL)，提取效果不佳，全液过柱损失较大，回收率偏低；此法中流动相的比例适用性较差，对于不同品牌、类型的仪器可参考性低，尤其针对超高效液相色谱仪，等度洗脱时色谱分离条件不佳，无法满足一些药物残留限量检测要求。因鸡蛋脂肪及蛋白质含量较高，而此法中每次加入的提取溶液和除脂溶液量少，需反复提取、除脂，前处理过程繁琐，不适于大批量样品的检测。此法虽然纯化效果好，但因步骤复杂，耗材消耗大、成本较高，亦不适合基层使用。

综上所述，现有技术存在的问题是：现有的检测鸡蛋中FQNs残留方法存在过程繁琐，检测时间长，色谱分离效果不佳，回收率低，耗材消耗大，成本高。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留的方法。

本发明是这样实现的，一种检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留的方法包括以下步骤：选用磷酸-乙腈作为提取溶液；水饱和正己烷的除脂方法；选择Waters Oasis HLB柱为固相萃取柱；选择1/4提取液过柱；选择89％(0.05mol/L磷酸/三乙胺):11％的流动相比例时；保留时间：恩诺沙星：8.41±0.5min，环丙沙星：5.41±0.5min，达氟沙星：7.33±0.5min，沙拉沙星：12.53±0.5min。

进一步，所述检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留的方法包括以下步骤：

步骤一，称取2±0.05g均匀鸡蛋试样，置于离心管中，精确加入磷酸-乙腈提取液20.0mL，搅匀、涡旋混合10min，9000r/min冷冻离心10min；上清液转入另一离心管；

步骤二，上清液中加入10mL水饱和正己烷，涡旋混匀5min，9000r/min冷冻离心10min，去除上层正己烷及固体，再加入10mL水饱和正己烷，重复除脂一次；弃去上层正己烷，下层为备用液；

步骤三，HLB柱依次用5mL乙腈，5mL乙腈-缓冲液和5mL磷酸盐提取液淋洗活化；备用液取5.0mL(过柱，3mL水淋洗，真空抽干；加入2mL乙腈-缓冲液洗脱，真空抽干，过0.22μm微孔滤膜后上机分析；

步骤四，采用ACQUITY UPLC BEH C18选定色谱分析。

进一步，所述步骤四中色谱柱：流动相：0.05mol/L磷酸/三乙胺：乙腈＝89:11；流速：0.25mL/min；检测波长：λex为280nm，λem为450nm；进样量：2μL。

进一步，所述步骤四中各药物保留时间：恩诺沙星：8.41±0.5min，环丙沙星：5.41±0.5min，达氟沙星：7.33±0.5min，沙拉沙星：12.53±0.5min。

本发明的另一目的在于提供一种利用所述检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留的方法检测的氟喹诺酮类药物。