[发明专利]一种三七的组织培养方法

说明书

本发明属于植物组织培养技术领域，具体公开了一种三七的组织培养方法。本发明三七的组织培养方法包括以下步骤：(1)三七外植体的选取与预处理：剪取的叶片作为外植体，并用多菌灵溶液浸泡；(2)灭菌：用酒精浸泡后，再用氯化汞溶液浸泡；(3)外植体诱导培养：将上述灭菌后的外植体接种于初代培养基中进行暗培养，得愈伤组织；(4)增殖培养：将上述得到的愈伤组织接种于增殖培养基中进行培养；(5)分化培养：将上述经过增殖培养获得的愈伤组织接种于分化培养基中进行培养，即可得到分化的组培苗。用本发明的组织培养方法来对三七植株的外植体进行培养，愈伤组织的诱导率高、愈伤组织生长状态好，同时，愈伤组织的分化效果好并能实现生根。

【技术领域】

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种三七的组织培养方法。

【背景技术】

三七是我国传统珍贵的中药材，其为五加科属多年生直立草本植物。三七全身是宝，其茎、叶、花、果实在民间也作为药，具有较高的药用价值，但主要是以根为药，晒干的根性温，味道干苦回甜，其含有24种三七皂苷、17种氨基酸以及三七多糖、三七黄酮等多种生理活性物质，具有散瘀、消肿、止痛等多种外用功效作用，并具有降血糖和降血脂的功效。

但是目前三七野生资源难以满足日益增长的医药领域的需求，而在三七人工种植产业中，缺乏优质三七苗，病虫害严重，种植困难，产量低。

采用生物技术可以获得三七愈伤组织，进而可以进行三七组织培养、细胞培养、原生质体培养等研究，对三七种质资源的利用与保护，三七生理、生化、遗传、病理等研究有重要作用。而目前关于三七愈伤组织培养的研究较少。

【发明内容】

本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种三七的组织培养方法。用本发明的组织培养方法来对三七植株的外植体进行培养，愈伤组织的诱导率高、愈伤组织生长状态好，同时，愈伤组织的分化效果好并能实现生根，因此，本发明的组织培养方法操作简便、成本低，可有效为进一步繁殖三七种苗提供技术支持，促进三七产业的发展。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种三七的组织培养方法，包括以下步骤：

(1)三七外植体的选取与预处理：选取新鲜嫩绿、健康的三七植株，剪取三七植株的叶片作为外植体，并置于烧杯中；使用干净的软毛刷在水中轻刷上述剪取的叶片的表面后，采用质量分数为0.1％的多菌灵溶液浸泡10-20min；倒出多菌灵溶液并用纱布包住烧杯口后，用流水冲洗10-30min；

(2)灭菌：采用体积分数为75％的酒精浸泡上述经过预处理的外植体20-40s后，用无菌水冲洗3次，再用质量分数为0.1％的氯化汞溶液浸泡7～10min，最后再用无菌水冲洗5次；

(3)外植体诱导培养：将上述灭菌后的外植体接种于初代培养基中进行暗培养，得愈伤组织；所述初代培养基组成为：在MS培养基中添加1.8-2.3mg/L的2,4-D、0.8-1.3mg/L的KT、0.9-1.2mg/L的6-BA和0.3-0.6mg/L NAA；

(4)增殖培养：将上述得到的愈伤组织接种于增殖培养基中进行培养；所述增殖培养基组成为：在MS培养基中添加0.25-1.0mg/L的6-BA和0.1-0.5mg/L的NAA；

(5)分化培养：将上述经过增殖培养获得的愈伤组织接种于分化培养基中进行培养，即可得到分化的组培苗；所述分化培养基组成为：在B₅培养基中添加0.6-1.1mg/L的6-BA和0.08-0.2mg/L的NAA。

进一步的，步骤(1)中，所述外植体还可以是三七植株的叶柄或茎段。

进一步的，步骤(2)中，所述氯化汞溶液中添加有2-3滴的吐温-80。