[发明专利]一种三七的组织培养方法

权利要求书

1.一种三七的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)三七外植体的选取与预处理：选取新鲜嫩绿、健康的三七植株，剪取三七植株的叶片作为外植体，并置于烧杯中；使用干净的软毛刷在水中轻刷上述剪取的叶片的表面后，采用质量分数为0.1％的多菌灵溶液浸泡10-20min；倒出多菌灵溶液并用纱布包住烧杯口后，用流水冲洗10-30min；

(2)灭菌：采用体积分数为75％的酒精浸泡上述经过预处理的外植体20-40s后，用无菌水冲洗3次，再用质量分数为0.1％的氯化汞溶液浸泡7～10min，最后再用无菌水冲洗5次；

(3)外植体诱导培养：将上述灭菌后的外植体接种于初代培养基中进行暗培养，得愈伤组织；所述初代培养基组成为：在MS培养基中添加1.8-2.3mg/L的2,4-D、0.8-1.3mg/L的KT、0.9-1.2mg/L的6-BA和0.3-0.6mg/L NAA；

(4)增殖培养：将上述得到的愈伤组织接种于增殖培养基中进行培养；所述增殖培养基组成为：在MS培养基中添加0.25-1.0mg/L的6-BA和0.1-0.5mg/L的NAA；

(5)分化培养：将上述经过增殖培养获得的愈伤组织接种于分化培养基中进行培养，即可得到分化的组培苗；所述分化培养基组成为：在B₅培养基中添加0.6-1.1mg/L的6-BA和0.08-0.2mg/L的NAA。

2.根据权利要求1所述一种三七的组织培养方法，其特征在于，步骤(1)中，所述外植体还可以是三七植株的叶柄或茎段。

3.根据权利要求1所述一种三七的组织培养方法，其特征在于，步骤(2)中，所述氯化汞溶液中添加有2-3滴的吐温-80。

4.根据权利要求1所述一种三七的组织培养方法，其特征在于，步骤(3)中，所述初代培养基组成为：在MS培养基中添加2.0mg/L的2,4-D、1.0mg/L的KT、1.0mg/L的6-BA和0.5mg/LNAA。

5.根据权利要求1或4所述一种三七的组织培养方法，其特征在于，步骤(3)中，所述初代培养基的pH为5.8。

6.根据权利要求1所述一种三七的组织培养方法，其特征在于，步骤(4)中，所述增殖培养基组成为：在MS培养基中添加0.7mg/L的6-BA和0.3mg/L的NAA。

7.根据权利要求1所述一种三七的组织培养方法，其特征在于，步骤(5)中，所述分化培养基组成为：在B₅培养基中添加1.0mg/L的6-BA和0.1mg/L的NAA。