[发明专利]一种抗菌肽-壳聚糖复合物、其制备方法及其应用

权利要求书

1.一种抗菌肽-壳聚糖复合物，其中抗菌肽上的羧基和壳聚糖上的氨基通过酰化反应偶联。

2.权利要求1所述的抗菌肽-壳聚糖复合物，其中所述抗菌肽选自SEQ ID Nos.1-4所示的肽中的一种或几种。

3.权利要求2所述的抗菌肽-壳聚糖复合物，其中所述抗菌肽为SEQ ID No.1、SEQ IDNo.2或它们的组合。

4.权利要求1所述的抗菌肽-壳聚糖复合物，其中所述抗菌肽-壳聚糖复合物中的壳聚糖部分选自壳聚糖、季铵盐化壳聚糖、磺酸化壳聚糖或磷酸化壳聚糖，其中它们的分子量为3.5～10KD。

5.一种制备权利要求1-4中任一项的抗菌肽-壳聚糖复合物的方法，所述方法包括下述步骤：

(1)称取50～100mg壳聚糖，溶解于10～50mL pH 6～7的PBS缓冲液，

(2)精密称取50～100mg抗菌肽，溶解于10～30mL pH 6～7的PBS缓冲液，

(3)精密称取40～100mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和50～250mgN-羟基琥珀酰亚胺，加入至步骤(2)制得的包含抗菌肽的PBS溶液中，4℃避光搅拌十分钟，活化羧基，

(4)将步骤(1)制得的壳聚糖溶液滴加入步骤(3)制得的包含抗菌肽、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的PBS溶液中，4℃避光搅拌过夜，

(5)转移步骤(4)的溶液至截留分子量为6～8kDa的透析袋中，在4℃避光条件下，用超纯水透析24小时除去1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺和游离的壳聚糖，即得到所述抗菌肽-壳聚糖复合物。

6.根据权利要求5所述的方法，所述方法还包括下述步骤：

(6)将步骤(5)得到的透析液冻干，-20℃保存。

7.一种抗菌肽-壳聚糖-细胞生长因子的纳米粒，其中所述细胞生长因子被包裹在权利要求1-4中任一项所述的抗菌肽-壳聚糖复合物中，其中所述抗菌肽-壳聚糖复合物与所述细胞生长因子的摩尔比在10∶1～1∶5的范围内，优选为5∶1。

8.权利要求7所述的抗菌肽-壳聚糖-细胞生长因子的纳米粒，其中所述细胞生长因子选自成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、角朊细胞生长因子或它们的任意组合，优选表皮细胞生长因子。

9.制备权利要求7所述的抗菌肽-壳聚糖-细胞生长因子的纳米粒的方法，所述方法包括下述步骤：

(1)室温下(25℃)，将权利要求1-4中任一项的抗菌肽-壳聚糖用1％醋酸配制成0.5～2mg mL-1的抗菌肽-壳聚糖醋酸溶液，用0.1～1mol L-1NaOH调节pH值至5～6，

(2)向步骤(1)的溶液中加入10～20μg细胞生长因子，恒温磁力搅拌器控制温度25～40℃，转速200～400r min-1，缓慢滴加浓度为0.5～2mg mL-1的多聚磷酸钠(TPP)水溶液，滴加完毕后继续搅拌15min，得到抗菌肽-壳聚糖-细胞生长因子纳米粒混悬液，

(3)将步骤(2)制得的混悬液以1w～3w r min-14℃离心30～60min，收集沉淀物，分散在注射用水中，-40℃冷冻干燥得到抗菌肽-壳聚糖-细胞生长因子纳米粒冻干粉，避光储存。

10.一种化妆品，其包含有效量的权利要求7或8所述的抗菌肽-壳聚糖-细胞生长因子的纳米粒，优选地，所述化妆品为凝胶剂、脂质体或乳液剂型。