[发明专利]一种提高水稻抗旱能力的烟曲霉的抗氧化产物的分离鉴定及其应用

权利要求书

1.(Z)-N-(4-羟基苯乙烯基)甲酰胺在制备提高水稻抗干旱胁迫的改良剂上的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，(Z)-N-(4-羟基苯乙烯基)甲酰胺为烟曲霉的抗氧化产物。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的烟曲霉保藏名称为Aspergillus fumigatus SG17；保藏单位：中国典型培养物保藏中心；保藏地址为中国，武汉，武汉大学；保藏日期：2015年5月11日；保藏编号为，CCTCC NO：M 2015286。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，(Z)-N-(4-羟基苯乙烯基)甲酰胺的使用浓度为0.05-0.2mg/mL。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，(Z)-N-(4-羟基苯乙烯基)甲酰胺的使用浓度为0.1mg/mL。

6.根据权利要求1-5任一项所述的应用，其特征在于(Z)-N-(4-羟基苯乙烯基)甲酰胺的分离方法，包括如下步骤：

（1）菌株活化及发酵培养：将内生真菌烟曲霉SG17接种在PDA固体培养基上，等生长到表型单一菌落时，挑取孢子放在SDA液体发酵培养基培养，得到内生真菌发酵菌悬液；

（2）发酵液酯相初提物的制取：将内生真菌发酵菌悬液真空抽滤分离，得到菌体与滤液；乙酸乙酯萃取滤液得到发酵液乙酸乙酯相，发酵液乙酸乙酯相旋蒸至粘稠状，收集待用，为发酵液酯相初提物；

（3）TLC分离发酵液酯相初提物：以石油醚与丙酮混合液分离发酵液酯相初提物后，得到分离样品；

（4）高效液相色谱分析：取分离样品用甲醇完全溶解，用微孔过滤器过滤，取滤液进行半制备HPLC分离、纯化，得到化合物NFA ，即为(Z)-N-(4-羟基苯乙烯基)甲酰胺；

所述的内生真菌烟曲霉保藏名称为Aspergillus fumigatus SG17；保藏单位：中国典型培养物保藏中心；保藏地址为中国，武汉，武汉大学；保藏日期：2015年5月11日；保藏编号为，CCTCC NO：M 2015286。

7.权利要求6所述的应用，其特征在于，步骤（3）中分离样品分离的片段为多段时，采用T-AOC法和DPPH自由基清除法测定多个片段的抗氧化活性，抗氧化活性高则进行高效液相色谱分析。

8.权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的石油醚与丙酮的体积比为1：1-3。

9.权利要求6所述的应用，其特征在于，色谱分离纯化条件：分析柱为Cosmosil MS-IIRP-C₁₈色谱柱5μm，250×10mm分析型，流动相：乙腈：水= 60：40 V/V，流速：3.0 mL/min，紫外检测波长：254 nm；半制备HPLC分离NFA时，ENFA，即(E)-N-(4-羟基苯乙烯基)甲酰胺保留时间为9.58-10.00 min，NFA，即(Z)-N-(4-羟基苯乙烯基)甲酰胺保留时间为10.78-11.30min。