[发明专利]一种旱地木槿种子无菌萌发与快速繁殖方法

说明书

一种旱地木槿Hibiscus aridicola Anthony种子无菌萌发与快速繁殖的方法。以旱地木槿成熟种子为外植体，通过外植体消毒、种子无菌萌发、增殖与生根一系列培养步骤，有效解决了旱地木槿人工繁殖、引种驯化及其在园林园艺景观上的开发利用，同时有效避免野生资源过度利用所造成的自然植株量减少与自然植被区遭受破坏的问题，在开发利用方面具有重要意义。本发明提供的方法，种子20天开始萌发，无菌萌发率60％，繁殖周期30天，增殖系数为5，生根率为98％，移栽成活率95％，极大地提高了旱地木槿的繁殖数量与生长速率，为该物种的引种驯化及园艺开发、保存和规模化生产提供了技术支持。

技术领域

本发明涉及生物技术中植物种子无菌萌发与快速繁殖方法，具体地说涉及到旱地木槿种子无菌萌发与快速繁殖方法。

背景技术

旱地木槿Hibiscus aridicola Anthony是隶属于锦葵科木槿属的美丽多花小灌木。旱地木槿是金沙江干热河谷特有种和地区标志种，仅分布于云南丽江和四川盐边地区，海拔高600-2500米的干热和干暖河谷中。由于分布点少于5个，种群持续衰退，2004年被列入《中国物种红色名录》濒危种类[EN B2ab(ii)]。近年来，由于大坝建设，生境丧失，及人类活动的影响，该物种的生存环境受到严重威胁。

目前，生物技术中的无菌快速繁殖已成为中药材、花卉、濒危物种、经济林果等种苗生产的重要手段。

迄今为止，现有技术中未见有旱地木槿种子无菌萌发与快速繁殖方面的报道。

发明内容

本发明的目的是提供旱地木槿种子无菌萌发与快速繁殖的方法，填补旱地木槿繁殖在生物技术上的空白，同时解决旱地木槿在野外分布区域狭窄，引种驯化难度大的问题。本发明为旱地木槿全面的开发和持续利用奠定了种苗繁育基础。

为了实现本发明的目的，本发明提供了如下的技术方案：

一种旱地木槿种子无菌萌发与快速繁殖的方法，该方法包括外植体选择与消毒、种子无菌萌发培养、增殖与继代培养、壮苗与生根培养、瓶苗移栽步骤，

所述外植体选择与消毒是取旱地木槿略泛黄的饱满果实，用1％肥皂水浸泡10分钟，经流水冲洗干净后进行组培常规外植体消毒；

所述种子无菌萌发培养是：在种子无菌萌发培养基中暗培养7天后进行光照，光照强度为1000LUX，温度为23～30℃，种子无菌萌发培养基为改良的MS培养基，将NH₄NO₃1650mg/L减少为400mg/L，KNO₃由1900mg/L减少为450mg/L，不加其他有机物，其余元素不变，20天后，种子开始萌发；

所述的增殖与继代培养是在增殖与继代培养基中培养，增殖与继代培养基为MS培养基+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L IAA+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH5.8，培养周期为30天；

所述的壮苗与生根培养是在壮苗与生根培养基中培养，壮苗与生根培养基为MS培养基+0.3mg/LNAA+0.3mg/L IAA+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH5.8，培养周期20天；

所述的瓶苗移栽是：将生根瓶苗提前一周置放于大棚炼苗，准备基质，基质为体积比的珍珠岩∶腐殖土∶生红土＝1∶2∶3，用800倍多菌灵进行喷施拌土，用塑料膜密封消毒7天，调节pH至5.8，开瓶取苗，洗净基部培养基，移栽，及时喷水并覆盖塑料膜保湿，大棚温度为20～30℃，空气湿度50～60％，基质湿度75～85％。

根据所述的旱地木槿种子无菌萌发与快速繁殖方法，所述外植体选择与消毒是取旱地木槿略泛黄的饱满果实为外植体，用1％肥皂水浸泡10min，经流水冲洗干净后，拿到超净台上，用75％的酒精消毒15min，无菌水冲洗3遍后，去掉果皮，取出种子，用0.1％升汞溶液进行表面消毒5min，无菌水清洗3～5次，接种于准备好的旱地木槿种子萌发培养基中，每瓶5粒。