[发明专利]一种固定化酶溢油降解剂的制备方法

权利要求书

1.一种固定化酶溢油降解剂的制备方法，其特征在于：所述固定化酶溢油降解剂的制备方法包括：

吸附：将芝麻秸秆活性碳与酶液按照质量比1:5-6均匀混合进行吸附，吸附温度为23-25℃，恒温吸附1.5-3.0小时；

交联：将质量比为1:4-6:9-10:15-20的聚乙二醇、海藻酸钠、去离子水、复合酶液混合得混合溶剂，然后按照重量比1：1.5-1.8将溶剂滴加入交联剂中，控制温度为0-4℃，在冰水浴中搅拌交联5-15分钟，然后移至室温干燥20-30分钟即得到固定化酶微球，将得到的固定化酶微球用生理盐水冲洗3-5遍，即为固定化酶溢油降解剂；

吸附步骤中的芝麻秸秆活性碳的制备方法包括：

磷酸活化：称取干燥后的芝麻秸秆粉与磷酸均匀混合，充分搅拌后，使用捏合机在130-140℃捏合30-45分钟，捏合后将样品造粒成3-4mm的柱状颗粒，样品硬化后，在高温炉中进行磷酸活化，活化后将样品冷却至室温，用去离子水洗涤至pH为5-7，烘干后即为磷酸活化样；

蒸汽活化：取50-60g磷酸活化样重新置于高温炉中，以3.0-3.5mL/min的进水量，在水蒸气气氛下二次活化，活化后将样品冷却至室温，粉碎过150-250目筛即得芝麻秸秆活性碳；

所述酶液的制备步骤为：将培养7-15天后并且处于对数生长期的小球藻液进行抽滤，滤膜选用0.35-0.45μm，取下含有小球藻的滤膜，液氮冷冻，之后加入2-3倍的PBS缓冲液；在2-4℃温度下进行研磨，研磨液倒入离心管并在2-4℃、10000-12000r/min的条件下离心15-25分钟，取出上清液即得酶液，放于0-4℃保存；

所述交联剂是质量比为1:0.3:2.0:15的正硅酸甲酯、3,5-二氟苯甲酸、甲基三氧甲基硅烷和甲醇在冰水浴中的混合溶液。

2.根据权利要求1所述的一种固定化酶溢油降解剂的制备方法，其特征在于：所述磷酸活化步骤中芝麻秸秆粉与磷酸的质量比为1:1.2-1.5。

3.根据权利要求1所述的一种固定化酶溢油降解剂的制备方法，其特征在于：所述磷酸活化步骤中活化温度为450-460℃，活化时间为20-30分钟。

4.根据权利要求1所述的一种固定化酶溢油降解剂的制备方法，其特征在于：所述蒸汽活化中水蒸气的温度为875-885℃，活化时间为1.5-2.5小时。

5.根据权利要求1所述的一种固定化酶溢油降解剂的制备方法，其特征在于：所述酶液的制备步骤中PBS缓冲液的pH为7.0-7.5，浓度为0.4-0.5mol/L。

6.根据权利要求1所述的一种固定化酶溢油降解剂的制备方法，其特征在于：所述交联步骤中聚乙二醇的分子量为400-800；海藻酸钠的浓度为0.85-1.05mol/L。