[发明专利]一种山萮菜药材的HPLC-DAD指纹图谱质量测定方法

说明书

本发明公开了一种山萮菜药材的HPLC‑DAD指纹图谱质量测定方法，其步骤包括，分别制备供试品溶液和3‑丁烯基异硫氰酸酯对照品、5‑甲硫戊基‑异硫氰酸酯对照品、6‑甲硫己基‑异硫氰酸酯对照品制备得到的对照品溶液后，注入高效液相色谱仪，以高效液相色谱法采用梯度脱洗进行测定，得到山萮菜药材的指纹图谱。本发明方法采用山嵛菜药材以高效液相色谱法采用梯度脱洗进行测定，通过构建嵛菜药材的指纹图谱，真实反映出山嵛菜药材所含特征物质，分析测定山嵛菜药材中异硫氰酸酯类化合物，同时可作为山嵛菜药材的质量控制方法，具有分离效果好、灵敏度高的特点。

技术领域

本发明是一种山萮菜药材的HPLC-DAD指纹图谱质量测定方法，具体涉及对山萮菜药材进行的HPLC-DAD指纹图谱质量评价方法，属于中药质量控制领域。

背景技术

山嵛菜( Eutrema wasabi Maxim)，又称山葵，是十字花科山嵛菜属多年生宿根草本植物。山嵛菜含有丰富的芥子油，以具独特的香、辛、甘粘的特性而居各种香辛调味之首，此外，还具有助消化、消除 毒、抗活性氧自由基及拮抗多种人体疾病病菌的作用，具有较高的食用保健价值。其中的主要辛辣成分异硫氰酸酯( Isothiocyanate) 更具有抗菌、抗癌、抗氧化等多种药理作用。山嵛菜中的辛辣成分异硫氰酸酯是植物细胞遭破坏时在一定的外界条件下由内源酶催化母体硫葡糖苷而产生，它的结构决定了它的化学活泼性及易挥发性，在保存过程中易降解。

在已有的文献报道中，人们对其提取工艺、种植技术、芥末酱研制、营养成分等的研究较多，例如，李建颖、卜路霞等人发表的“自菜粕中提取芥子油甙的最佳工艺研究”（《食品研究与开发》2010年11月第31卷第11期）中提到，菜籽粕的提取芥子油甙的最佳溶剂选择为甲醇，特别是用40%甲醇提取所测得的芥子油甙含量最高，其次，正交试验对最佳工艺条件进行了验证，其结果表明，影响芥子油甙提取的主要因素依次是甲醇浓度、温度、料液比和时间。除上述研究外，现有文献报道中鲜有关于山嵛菜药材的质量控制方面的研究，

我们知道，中药质量控制是现代中药发展的瓶颈之一，目前我国在现有标准中，中药 材、中成药的质量标准大量限于鉴别外观、性状检查，很少对其中有效成分进行检查，即使 在建立成分测定的标准中，所测成分大部分仅为1～2 个指标成分，而不是直接与疗效相关的有效成分。对于山萮菜药材而言，整个药材市场缺乏对药材准确的，科学的质量评价。现有技术中，色谱指纹图谱分析是一种十分可行的质量控制模式，它可为中药材和中成药提供综合的、宏观的和可量化的质量评价。为此，本发明提出了一种山萮菜药材的HPLC-DAD指纹图谱质量测定方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种山萮菜药材的HPLC-DAD指纹图谱质量测定方法，该测定方法采用山嵛菜药材以高效液相色谱法采用梯度脱洗进行测定，通过构建嵛菜药材的指纹图谱，真实反映出山嵛菜药材所含特征物质，分析测定山嵛菜药材中异硫氰酸酯类化合物，同时可作为山嵛菜药材的质量控制方法，具有分离效果好、灵敏度高的特点。

本发明通过下述技术方案实现：一种山萮菜药材的HPLC-DAD指纹图谱质量测定方法，包括以下步骤：

（A）供试品溶液的制备：取山嵛菜药材溶置于甲醇中，经超声处理后，再放冷过滤，取续滤液作为供试品溶液，待用；

（B）对照品溶液的制备：取3-丁烯基异硫氰酸酯对照品，5-甲硫戊基-异硫氰酸酯对照品，6-甲硫己基-异硫氰酸酯对照品，溶解于甲醇中，配制成对照品溶液，待用；

（C）测定：分别吸取供试品溶液与对照品溶液注入高效液相色谱仪，以高效液相色谱法采用梯度脱洗进行测定，得到山萮菜药材的指纹图谱。

所述步骤（A）中，取山嵛菜药材粉末0.5～2.0g，置于20～80ml甲醇中，经超声处理0.5～1h后，放冷至10～30℃后摇匀，再用0.22um的微孔滤膜过滤后，取续滤液作为供试品溶液。