[发明专利]一种提高抗CD43单克隆抗体生物学活性的方法

说明书

本发明提供了一种提高抗CD43单克隆抗体生物学活性的方法，包括在单克隆抗体生产细胞的培养过程中添加Kifunensine的步骤。本发明的方法能够有效地用于提高抗CD43单克隆抗体的生物学活性，并且操作简便，成本低廉，具有广泛的工业应用前景。

技术领域

本发明属于生物制药领域，具体涉及一种提高抗CD43单克隆抗体生物学活性的方法。

背景技术

急性白血病(Acute leukemia,AL)是一组造血干细胞异常增生的恶性克隆性疾病，属于血液系统恶性肿瘤，可发生于任何年龄，但是在儿童及35岁以下成人的恶性肿瘤中居第一位，死亡率较高。我国急性白血病患者约为200-300万人，每年新增诊断患者3-4万人。急性白血病是全身性的恶性肿瘤，传统化疗、诱导治疗和造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)是主要治疗方法。但传统化疗选择性差，副作用大；诱导治疗对某些白血病不敏感；而HSCT受供体和费用的限制以及会产生移植物抗宿主病等原因，应用并不广泛。作为新的治疗手段，单克隆抗体药物以亚型特异性，毒副作用小，适用人群广等特点在急性白血病的治疗中显示了良好的临床应用前景和巨大的商业价值。

治疗性单克隆抗体作为一种具有独特优势的生物靶向治疗药物，已成为目前全球药物研发的热点。截止到2013年2月，已有34个治疗性抗体获得美国FDA批准上市，用于各种疾病的治疗。据统计，目前有多达350余种抗体产品正处于临床试验阶段，其中29个已进入Ⅲ期临床试验。开发抗体新靶点和新适应证，研究和设计更为安全有效的新型抗体分子及抗体组合疗法，寻找生物标记指导抗体对病人的有效治疗，是当前和今后一段时期内该领域发展的主要方向。

目前，由FDA批准用于治疗血液系统恶性肿瘤的单克隆抗体共有6种，在临床上取得了良好的治疗效果。如抗CD20利妥昔单抗与化疗联合治疗成熟B细胞急性淋巴细胞白血病(ALL)及Burkitt’s淋巴瘤。抗CD52单抗(阿仑单抗)和抗CD22单抗(依帕珠单抗)在一些急性白血病的治疗研究中也显示良好的疗效。

CD43是一种在人急性白血病和淋巴母细胞性淋巴瘤细胞上表达的抗原表位，但其不在成熟的造血细胞和造血干细胞上表达。中国专利ZL200680020846.5公开了作用靶点是CD43表面抗原的抗CD43单克隆抗体及其制备方法，可用于治疗急性白血病、具有白血病急性发作的慢性白血病和淋巴母细胞性淋巴瘤。作为潜在的国际一类血液科新药，由于其与传统的治疗急性白血病药物作用靶点不同，抗CD43单抗的开发为广大急性白血病患者提供更为有效的治疗手段，同时也显现巨大的学术和商业价值，具有重大的社会和经济效益。

Kifunensine(几夫碱)是一种α-甘露糖苷酶抑制剂，将其用于处理CHO细胞后能改善产物甘露糖基化水平。

发明内容

本发明通过在CHO细胞工艺培养阶段中，考察培养体系中添加不同作用浓度的kifunensine对于细胞生长、抗CD43单克隆抗体表达量和生物学活性的影响情况，结果表明高浓度的kifunensine对细胞生长和抗CD43单克隆抗体表达量具有抑制作用，而添加20-100nmol/ml的合适浓度的kifunensine对细胞生长和抗CD43单克隆抗体表达量无明显影响，并且能够显著提高抗CD43单克隆抗体的生物学活性。

为了实现上述目的，本发明采用了如下的技术方案：

本发明提供了一种提高抗CD43单克隆抗体生物学活性的方法，包括在抗CD43单克隆抗体生产细胞的培养过程中添加Kifunensine的步骤。

其中，所述Kifunensine的作用浓度为20-100nmol/ml，优选的，所述Kifunensine的作用浓度为50-100nmol/ml，更优选的，所述Kifunensine的作用浓度为100nmol/ml。

其中，所述Kifunensine的作用时间为在所述培养过程的第0天一次性添加。