[发明专利]一种基于Hochest333258的肿瘤细胞增殖检测方法和应用

权利要求书

1.一种基于Hochest333258的肿瘤细胞增殖检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

传代培养肿瘤细胞至细胞培养板，细胞经计数后进行倍比稀释得到不同细胞个数的梯度系列，在培养基中进行常规培养，然后加入含Hochest333258的溶液，混匀后静置一段时间，弃去细胞培养基，用PBS缓冲液洗去残余培养基后再加入PBS缓冲液，最后检测荧光值，通过荧光信号强度来判断细胞增殖水平或存活率。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的肿瘤细胞为人非小细胞肺癌A549细胞、人乳腺癌MCF-7细胞、人宫颈癌Hela细胞或小鼠黑色素瘤B16-F1细胞。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述倍比稀释时，形成的不同细胞个数的梯度系列为10000、5000、2500、1250、625、312/孔；同时每个梯度设置多个复孔。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的培养基为体积分数10%小牛血清的DMEM培养基，培养条件为：95%湿度、37℃、体积分数为5%CO₂，培养时间为24小时。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述含Hochest333258的溶液是将Hochest333258溶解在体积分数为50% DMSO中，先配置成浓度10mM的母液；加入含Hochest333258的溶液后，培养基中的含Hochest333258浓度为10μM ；混匀后静置时间为10min。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所用的PBS缓冲液的加入量为100μL/孔，检测时设置100μl/孔PBS缓冲液的孔作为空白对照。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：检测设备为荧光酶标仪，检测波长为340nm。

8.Hochest333258在肿瘤细胞增殖检测中的应用。