[发明专利]重构的HDL配制剂

说明书

本发明涉及重构的高密度脂蛋白(rHDL)配制剂，其包含载脂蛋白，脂质和冻干稳定剂。所述配制剂具有降低的肾毒性和良好的的长期稳定性，特别是呈冻干形式的配制剂。

本申请是申请号为201380057007.0、申请日为2013年10月31日、发明名称为“重构的HDL配制剂”的中国专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及重构的高密度脂蛋白配制剂，尤其涉及具有适宜的稳定性和药物用途的生物学特性的配制剂。

背景技术

高密度脂蛋白(HDLs)构成一系列存在于普通血清的脂蛋白颗粒。成熟HDL颗粒以含有蛋白质和脂质的球状结构形式存在。这些颗粒的外层中是更具极性的脂质、磷脂和游离胆固醇，全部具有向外指向含水环境的带电基团。更疏水的脂质比如酯化的胆固醇和甘油三酯位于颗粒的核心。新形成的或初生的HDL颗粒缺少脂质从而呈盘状。蛋白质组分包埋在外层中。主要蛋白质组分是具有较少量的Apo A-II，Apo A-IV，Apo CIII，Apo D，Apo E和Apo J的载脂蛋白A-I(Apo A-I)。各种其它蛋白质位于HDL颗粒上，比如卵磷脂-胆固醇乙酰基转移酶，PAF乙酰基水解酶和对氧磷酶。HDLs的特征是高密度(1.063g/ml)和小尺寸(Stoke直径＝5至17nm)。

已经努力开发人工HDLs，其能够输注入患者血流中以模拟天然HDLs的生物学效果。这些人工颗粒一般称为重构的HDL(rHDL)，或有时称为HDL模拟物或合成的HDL颗粒。人工颗粒含有天然颗粒组分，尤其是Apo A-I和脂质。例如，WO 2012/000048描述包含ApoA-I，磷脂酰胆碱(PC)和少量胆酸钠的rHDL。WO 2012/109162描述包含Apo A-I，鞘磷脂(SM)和磷脂酰甘油(例如1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-[磷酸-rac-(l-甘油)](DPPG))的rHDL。

方便的是在使用前冻干(冷冻-干燥)rHDL配制剂。冻干是制备固体蛋白质药物所通常使用的方法。然而，该过程产生各种冷冻和干燥压力，比如溶剂化蛋白质的浓度，形成冰晶体，pH变化等。全部这些压力能够以不同程度使蛋白质变性。从而，在蛋白质配制剂中常常需要稳定剂来保护在冷冻和干燥过程期间的蛋白质稳定性。为了保持rHDL配制剂在冻干期间的稳定性，已使用稳定剂如糖类和糖醇。例如，US 5,089,602公开血浆衍生的脂蛋白，其用10％蔗糖或10％蔗糖和5％甘露醇的混合物稳定化。WO 2012/000048公开糖和糖醇稳定剂，以约65至85g/L rHDL配制剂(相当于约6.5至8.5％w/w)的浓度使用。WO 2012/109162公开作为稳定剂的蔗糖和甘露醇，分别以4％w/w和2％w/w用于混合物中。Kim等人，Biotechnology and Bioprocess Engineering 16，785-792(2011)调查了rHDL的制备和放置稳定性。其中，Apo A-I:大豆PC比率1:150的rHDL并不能被1或5％蔗糖充分地稳定化，而10％蔗糖被描述为最佳。

这些文献的rHDL配制剂期望用于输注疗法，但是输注产品中的高糖浓度可以导致或恶化肾问题。在rHDL的靶标患者群体这是特别的问题，原因在于这些患者常常有肾损伤。

因此本发明的目的是，提供与这些先前的配制剂相比备择或改善的rHDL配制剂。尤其是，发明人寻求具有降低的肾毒性的稳定的rHDL配制剂。

该问题通过根据权利要求1的配制剂得以解决。进一步优选实施方式定义在从属权利要求中。

令人惊讶地，已发现权利要求1的rHDL配制剂显示良好的长期稳定性。通过含有比先前配制剂更少的冻干稳定剂，本申请配制剂也具有更低的肾毒性风险。低冻干稳定剂浓度还可以允许rHDL在rHDL功能的功能测试表现更佳。发明人还已发现氨基酸、特别是脯氨酸是有用的rHDL配制剂冻干稳定剂。

发明概要

本发明提供rHDL配制剂，其包含载脂蛋白、脂质和冻干稳定剂，其中载脂蛋白与脂质的比率是约1:20至约1:120(mol:mol)。