[发明专利]AAVS1位点定点整合外源基因的人iPS细胞的构建方法有效
| 申请号： | 201711123952.2 | 申请日： | 2017-11-14 |
| 公开（公告）号： | CN107937441B | 公开（公告）日： | 2021-02-26 |
| 发明（设计）人： | 刘晓玫;张春;姜岩;袁运;魏静;王东鑫;王飞飞;魏峥;曹金晶 | 申请（专利权）人： | 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 |
| 主分类号： | C12N15/864 | 分类号： | C12N15/864;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京远大卓悦知识产权代理有限公司 11369 | 代理人： | 韩飞 |
| 地址： | 215163 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | aavs1 定点 整合 基因 ips 细胞 构建 方法 | ||
【权利要求书】：
1.AAVS1位点定点整合外源基因的人iPS细胞的构建方法，其特征在于，包括：构建含有外源基因的第一重组质粒，所述第一重组质粒与pDG质粒共转染AAV-293细胞，从而包装得到第一rAAV；所述第一重组质粒中还含有AAV ITR；
构建含有AAV Rep78的第二重组质粒，所述第二重组质粒与pDG质粒共转染AAV-293细胞，从而包装得到第二rAAV；所述第二重组质粒中还含有AAV ITR；
所述第一rAAV和第二rAAV以15:1的比例共同转导人成体细胞，在转导人成体细胞时，所述第一rAAV的MOI值为105；
将所述外源基因定点整合于人成体细胞19号染色体的AAVS1位点，应用流式细胞技术检测并筛选得到定点整合外源基因的人成体细胞；将Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc引入到定点整合有外源基因的人成体细胞中，得到ips细胞。
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