[发明专利]一种适用于不同种源黑果枸杞一次性成苗的诱导方法

权利要求书

1.一种适用于不同种源黑果枸杞一次性成苗的诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)诱导基质准备

大量元素溶液配制 ，按硝酸钾3000.00mg/L、氯化钙150.00mg/L、硫酸镁500.00mg/L、磷酸二氢钾150.00mg/L、硫酸铵134.00mg/L、硫酸锰10.00mg/L的配比配制 1000mL大量元素溶液；微量元素溶液配制 ，按硼酸3.0mg/L、硫酸锌2.0mg/L、碘化钾0.75mg/L、硫酸铜0.025mg/L、钼酸钠0.25mg/L的配比配制 500mL微量元素溶液；铁盐溶液配制 ，按Fe₂·EDTA10.00mg/L的配比配制 500mL铁盐溶液；有机成分溶液配制 ，按肌醇100.0mg/L、烟酸1.0mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L的比例配制 500mL有机成分溶液；

不定芽诱导基质制作，加入所述大量元素溶液50mL，所述微量元素溶液、铁盐溶液、有机成分溶液各5mL，加入6-苄基氨基嘌呤(6-BA)0.5mg、萘乙酸(NAA)0.2mg，之后加入蒸馏水定容到1000mL，混合均匀后进行蒸煮，之后加入蔗糖15g、琼脂5g，将pH调整为5.8；制作完成后分装三角瓶、每瓶60～70mL，高温高压灭菌后待用；

根系诱导基质制作，加入所述大量元素溶液25mL，所述微量元素溶液、铁盐溶液、有机成分溶液各2.5mL，之后加入蒸馏水定容到1000mL，混合均匀后进行蒸煮，之后加入蔗糖7.5g、琼脂5g，将pH调整为5.8；制作完成后分装三角瓶、每瓶60～70mL，高温高压灭菌后待用；

(2)不同种源黑果枸杞茎段活性诱导

于当年春季，植物内源激素活性最强时，分别剪取不同种源黑果枸杞健康母株上当年生、没有病虫害及牲畜啃食的健康枝条，迅速将下切口剪成马蹄形，之后蘸取少量家用洗涤剂原液，以保证枝条的新鲜，然后带回实验室，用稀释浓度为50％的吐温80浸泡枝条1h以彻底清洗附着在枝条表面的粘性物质，之后用流动的自来水浸泡冲洗4h，冲洗之后沥干枝条上的水分并将其放入震荡培养箱中进行震荡培养；

(3)灭菌处理

将经过震荡培养后的不同种源黑果枸杞枝条置于超净工作台，采用75％的乙醇浸泡，浸泡期间用已灭菌的玻璃棒不断搅动，然后用无菌水冲洗7～8次，之后将冲洗干净的枝条放在经过高温灭菌并铺有滤纸的铝盒中，用镊子夹取滤纸充分吸干枝条表面残留的水渍后待用；

(4)不定芽增殖

剪除经过灭菌处理的枝条两端2～3cm，并将枝条上着生的叶片从叶柄基部剪除，之后将枝条剪成长1.5～2cm、并至少带有一个侧芽的茎段，放入培养皿，全部剪完后用镊子轻轻夹住茎段上端垂直插入所述不定芽诱导基质中，每瓶不定芽诱导基质中只扦插1个茎段，之后封口，在25℃条件下采用黑暗和光照交替培养的方式进行不定芽增殖；

(5)根系诱导

将步骤(4)中诱导30d的不定芽从基部剪切，剪成带有1～2个腋芽、长2cm的茎段，并将其转接插入装有所述根系诱导基质的三角瓶中，置于25±2℃条件下，黑暗培养4d，之后光照培养20d左右，使得根系长满整个三角瓶瓶底，得到符合移栽标准的瓶苗；

所述光照培养的条件为光照强度2000lx，光照时间12h/d；

(6)移栽

移栽前对玻璃温室或搭建的小拱棚进行土壤翻耕、平整、消毒、晾晒；之后将符合移栽标准的所述瓶苗连同三角瓶移至玻璃温室或搭建的小拱棚中，将瓶口开放1/3放置1d，第2d即可完全开瓶移栽；移栽前用镊子轻轻夹住瓶苗基部，夹出后放置在清水中，用清水冲洗干净瓶苗基部的根系诱导基质，冲洗干净后即可移栽至土壤中，株行距20～30cm，培养温度为25℃左右，湿度为70％左右；生长20d左右长出5～6片新叶，生长健壮，适应性强，即可进行露地定植，步骤(2)中所述震荡培养的震荡方式为左右循环、频率20r/min，温度为28℃，震荡时间为8h，步骤(4)中所述黑暗和光照交替培养的方式分为四个阶段：第一阶段，黑暗培养2d；第二阶段，光照强度为2000lx的条件下培养2d，每天光照12h；第三阶段，黑暗培养2d；第四阶段，光照强度为2000lx的条件下培养30d，每天光照14h。

2.根据权利要1所述的适用于不同种源黑果枸杞一次性成苗的诱导方法，其特征在于，步骤(3)中所述采用75％的乙醇浸泡的时间为15～35秒，具体时间根据枝条的老嫩程度确定。

3.根据权利要求1所述的一种适用于不同种源黑果枸杞一次性成苗的诱导方法，其特征在于，步骤(6)中所述的土壤翻耕、平整、消毒、晾晒条件为：移栽前3d喷洒5％的高锰酸钾溶液进行土壤消毒，喷洒后翻耕、晾晒3d，即可进行移栽。