[发明专利]14‑3‑3η抗体及其用于诊断和治疗关节炎的用途

说明书

本申请是申请日为2008年11月26日、申请号为“200880125676.6”、发明名称为“14-3-3η抗体及其用于诊断和治疗关节炎的用途”的中国专利申请的分案申请，原申请是国际申请PCT/CA2008/002094的中国国家阶段申请。

相关申请的交叉引用

本申请要求2008年11月27日提交的美国临时专利申请序列号No.60/990,520和2008年6月30日提交的美国临时专利申请序列号No.61/077,123的权益，其均通过引用以整体并入本文。

技术领域

本发明涉及特异性结合14-3-3蛋白之η同工型(isoform)并能够区分η同工型与其它14-3-3蛋白同工型的抗体。

背景技术

14-3-3蛋白是在真核生物中普遍表达的保守的细胞内调节分子家族。14-3-3蛋白能够结合多种功能各异的信号传导蛋白质，包括激酶、磷酸酶和跨膜受体。事实上，已报道超过100种信号传导蛋白质为14-3-3之配体。14-3-3蛋白可以被认为是34肽重复超家族(Tetratrico Peptide Repeat superfamily)的演化成员。它们一般具有9或10个α螺旋，并通常沿其氨基端螺旋形成同二聚体和/或异二聚体相互作用。这些蛋白质含有多个已知结构域，包括二价阳离子相互作用区域、磷酸化和乙酰化区域以及蛋白质水解切割区域等。14-3-3蛋白有七种不同基因编码的已知在哺乳动物中表达的同工型，其中每种同工型包含242～255个氨基酸。所述七种14-3-3蛋白同工型分别称为14-3-3α/β(alpha/beta)、14-3-3δ/ξ(delta/zeta)、14-3-3ε(epsilon)、14-3-3γ(gamma)、14-3-3η(eta)、14-3-3τ/θ(tau/theta)和14-3-3σ(sigma/stratifin)。

14-3-3蛋白具有高度的序列相似性。因此，抗14-3-3抗体通常识别多于一种14-3-3蛋白同工型。已经表征的几种抗14-3-3抗体制备物可商购获得。例如，识别14-3-3蛋白的兔多克隆抗体可从Biomol，Santa Cruz Biotechnology，Upstate Biotechnology，and Assay Designs获得。这些多克隆抗体制备物识别某种形式的14-3-3η；但是，它们并非相对于其它14-3-3蛋白同工型来说选择性针对η同工型。也参见Martin，H.等人(1993)Antibodies against the major brain isoforms of 14-3-3 protein.FEBS331：296-303。还参见2007年5月9日提交的WO 2007/128132。除了缺少同工型选择性之外，几乎没有14-3-3抗体显示识别天然构型的14-3-3蛋白。

已提示14-3-3蛋白参与多种疾病。然而，14-3-3蛋白的普遍存在和功能多样性极大地妨碍了与多种14-3-3蛋白同工型(“泛14-3-3抗体”)结合和/或不能识别天然构型14-3-3蛋白之抗体的治疗性应用。此外，已提示特定的14-3-3同工型参与特定的疾病，泛14-3-3抗体不能在诊断测定中进行确定无疑地检测，并且这些泛14-3-3抗体不能以靶向方式进行治疗。例如，已提示14-3-3η和14-3-3γ参与关节炎。参见2007年5月9日提交的WO 2007/128132。还参见Kilani等人(2007，J.Rheum.34：1650-1657；WO 2007/128132)，其报道14-3-3蛋白质家族的两个成员(具体为14-3-3η和14-3-3γ)存在于关节炎患者的滑膜液和血清中，并且这些同工型与滑膜液和血清中的MMP-1和MMP-3水平直接相关。

发明内容

本发明部分地来自于出人意料的发现：尽管14-3-3同工型之间具有高度的序列同一性，仍可使用选定的14-3-3η表位来制备针对天然构型14-3-3蛋白η同工型具有选择性的抗体。特别地，本发明提供了具有如下性质的抗14-3-3蛋白抗体：(i)通过例如免疫沉淀所证明地，特异性结合天然构型的14-3-3η蛋白；以及(ii)相对于其它14-3-3蛋白同工型来说，选择性地结合14-3-3η蛋白。该性质组合使得本发明的抗体区别于现有技术，并提供了选择性抗14-3-3η抗体在针对14-3-3η所参与之疾病的诊断和治疗方法中的用途。