[发明专利]消除脂血干扰的葡萄糖氧化酶测定方法

说明书

本发明公开了一种消除脂血干扰的葡萄糖氧化酶测定方法，属于利用可见光，通过测试反应的结果颜色变化来测试材料的方法。本发明的技术方案是：试剂Ⅰ中含有脂蛋白脂肪酶，甘油脱氢酶，NAD⁺，Triton X‑100，变旋酶；试剂Ⅱ中含有葡萄糖氧化酶，过氧化物酶，4‑氨基安替比林，2,4‑二氯酚等有效成分：其测定方法为：血清先与试剂Ⅰ于37℃温浴3～5分钟，甘油三酯在脂蛋白脂肪酶，甘油脱氢酶的作用下转变为二羟丙酮；加入试剂Ⅱ后，葡萄糖在葡萄糖氧化酶、过氧化物酶的作用下，与4‑氨基安替比林，2,4‑二氯酚缩合成红色醌亚胺，仪器以第一步反应为空白，由第二步产生的醌亚胺计算出葡萄糖的含量。

技术领域

本发明属于一种包含酶的测定方法；或是利用可见光，通过测试反应的结果产生颜色变化来测试材料的方法，特别是涉及一种用生化分析仪检测血清中葡萄糖的测定方法。

背景技术

血清葡萄糖常用的检测方法主要有葡萄糖氧化法、微电流法、氧速率法、已糖激酶法、邻甲苯胺法、葡萄糖脱氢酶法、气相色谱/同位素稀释质谱法等，国内临床实验室推荐使用葡萄糖氧化酶法。葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase，POD)使过氧化氢，4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应，红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。脂血标本是临床检验常见的干扰原因，血脂中的乳糜微粒和极低密度脂蛋白是悬浮颗粒，血清葡萄糖检测常用的比色法或比浊法有极大干扰。对于重度脂血样本，由于样本的本底吸光度过高，必须对样本进行预处理，常用的方法包括：

1、生理盐水稀释法：大部分全自动生化分析仪都具有自动稀释、自动换算功能；也可以先手工稀释，再将测定结果乘以稀释倍数。这种方法可以在一定程度上降低样本空白而提高测定的准确性，但是该法并不能完全消除脂浊对测定结果的影响，特别是要注意样本稀释后由于基质效应而导致测定结果出现一定的误差。

2、乙醚抽提法：在高脂血样本中加入有机溶剂乙醚，震荡混匀后离心，可有效地将样本中的甘油三酯等脂溶物质萃取出来，但是由于该方法加入了新的化学物质，会对有些检验项目的测定产生影响。

3、沉淀分离法：该方法来源于沉淀法测定HDL，即联合使用磷钨酸-镁沉淀剂和聚乙二醇-硫酸葡聚糖沉淀剂，沉淀血清中的乳糜微粒、极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、脂蛋白(a)，该方法对部分检验项目的测定会产生影响，且操作繁琐，因此该法也有一定的局限性。

4、干化学法：干化学分析仪是采用以Kubleka-Munk理论为主要理论基础的多层薄膜的固相试剂技术，将发生在液相反应物中的反应，转移到一个固相载体上，利用反射光度法和基于离子选择电极(ISE)的差示电位法进行检测的一类新型仪器。当全血通过多层薄膜的固相时，血细胞、脂浊微粒等物质可以被阻截，因此该法亦可有效地去除脂浊对生化检验结果的干扰。

5、高速离心法：将脂浊血清加盖密封，经高速离心后，血清可以分成两层，吸取下层的血清进行临床生化测定，适用大部分临床生化测定指标的测定。但该法设备要求较高，中小医疗机构没有高速离心机，限制了该法的使用。

随着社会经济的飞速发展，人们的生活水平逐步提高，但运动时间却越来越少，导致高脂血症的发病人数呈逐年递增的趋势，在临床中遇到的高脂血检验样本也越来越多。而高脂血症会对各种生化检验项目造成一定程度的干扰，这一直是困扰生化检验项目的一个重大难题，如果不及时消除高脂血症对生化检验项目的干扰，那么生化检测的结果将会受到一定程度的影响，从而间接的造成医生对病情诊断的失误，这对患者的生命健康造成了极大的威胁，必须尽快解决这一难题。

发明内容：

为了解决现有技术血清中葡萄糖测定方法存在内源性脂血干扰的问题，本发明提供一种经济方便易行，准确度更高、能够有效消除内源性脂血干扰的葡萄糖氧化酶测定方法。