[发明专利]一种呼吸道病原体抗原检测的试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括呼吸道病原体抗原检测膜条、生物素标记的混合单克隆抗体试剂、链霉亲和素、样本稀释液、显色底物、浓缩洗涤液和反应槽；所述呼吸道病原体抗原检测膜条设有检测区和质控区，所述检测区分别设有包被呼吸道合胞病毒单克隆抗体的检测线、包被腺病毒单克隆抗体的检测线、包被流感病毒A型单克隆抗体的检测线、包被流感病毒B型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒1型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒2型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒3型单克隆抗体的检测线、包被肺炎支原体单克隆抗体的检测线、包被肺炎衣原体单克隆抗体的检测线、包被嗜肺军团菌单克隆抗体的检测线和包被A群链球菌单克隆抗体的检测线。

2.如权利要求1所述的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的混合单克隆抗体试剂包括生物素标记的呼吸道合胞病毒单克隆抗体、生物素标记的腺病毒单克隆抗体、生物素标记的流感病毒A型单克隆抗体、生物素标记的流感病毒B型单克隆抗体、生物素标记的副流感病毒1型单克隆抗体、生物素标记的副流感病毒2型单克隆抗体、生物素标记的副流感病毒3型单克隆抗体、生物素标记的肺炎支原体单克隆抗体、生物素标记的肺炎衣原体单克隆抗体、生物素标记的嗜肺军团菌单克隆抗体和生物素标记的A群链球菌单克隆抗体。

3.如权利要求1所述的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，其特征在于，所述质控区设有包被羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控线。

4.如权利要求3所述的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，其特征在于，所述呼吸道病原体抗原检测膜条在沿长度方向依次设有包被羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控线、包被呼吸道合胞病毒单克隆抗体的检测线、包被腺病毒单克隆抗体的检测线、包被流感病毒A型单克隆抗体的检测线、包被流感病毒B型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒1型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒2型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒3型单克隆抗体的检测线、包被肺炎支原体单克隆抗体的检测线、包被肺炎衣原体单克隆抗体的检测线、包被嗜肺军团菌单克隆抗体的检测线和包被A群链球菌单克隆抗体的检测线。

5.如权利要求4所述的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，其特征在于，所述各个检测线相互平行且相邻检测线之间间隔相等，所述质控线与所述各个检测线相互平行，所述质控线和所述包被呼吸道合胞病毒单克隆抗体的检测线之间的间隔与所述各个检测线之间的间隔相等。

6.如权利要求1所述的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，其特征在于，所述呼吸道病原体抗原检测膜条为孔径大小是0.22μm的多孔硝酸纤维素膜，所述呼吸道病原体抗原检测膜条的长度为70-90mm，宽度为2.0mm-5.0mm。

7.如权利要求1所述的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素为碱性磷酸酶标记的链霉亲和素；所述样本稀释液含有三羟甲基氨基甲烷缓冲液；所述显色底物含有5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐与氯化硝基四氮唑蓝的混合物；所述浓缩洗涤液含有20倍浓缩的三羟甲基氨基甲烷缓冲液。

8.如权利要求1所述的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，其特征在于，所述反应槽呈凹槽状，用于检测时放置所述呼吸道病原体抗原检测膜条。

9.如权利要求1所述的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒在检测过程中的反应温度为37℃恒温。

10.如权利要求1-9任一项所述的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)检测前准备：将用于呼吸道病原体抗原检测的试剂盒和待测样本平衡至室温，将所述已平衡至室温的待测样本按预设的比例用样本稀释液进行稀释，获得待测稀释样本；将呼吸道病原体抗原检测膜条放入反应槽中；将浓缩洗涤液按照预设的比例稀释，获得工作洗涤液；

(2)孵育待测稀释样本：将所述待测稀释样本加入到所述反应槽中，所述待测稀释样本与所述呼吸道病原体抗原检测膜条上包被的羊抗鼠IgG多克隆抗体、呼吸道合胞病毒单克隆抗体、腺病毒单克隆抗体、流感病毒A型单克隆抗体、流感病毒B型单克隆抗体、副流感病毒1型单克隆抗体、副流感病毒2型单克隆抗体、副流感病毒3型单克隆抗体、肺炎支原体单克隆抗体、肺炎衣原体单克隆抗体、嗜肺军团菌单克隆抗体和A群链球菌单克隆抗体于37℃恒温孵育进行反应，获得检测膜条A；

(3)洗涤检测膜条A：倒掉所述反应槽内的所述待测稀释样本，加入所述工作洗涤液洗涤检测膜条A1min，倒掉所述工作洗涤液，反复冲洗3次，获得检测膜条B；

(4)孵育检测膜条B：将生物素标记的混合单克隆抗体加入到所述反应槽中，所述生物素标记的混合单克隆抗体与所述检测膜条B于37℃恒温孵育进行反应，获得检测膜条C；

(5)洗涤检测膜条C：倒掉反应槽内的所述生物素标记的混合单克隆抗体，加入所述工作洗涤液洗涤检测膜条C 1min，倒掉所述工作洗涤液，反复冲洗3次，获得检测膜条D；

(6)链霉亲和素结合：将链霉亲和素加入到所述反应槽中，所述链霉亲和素与所述检测膜条D于37℃恒温孵育进行反应，获得检测膜条E；

(7)洗涤检测膜条E：倒掉反应槽内的所述链霉亲和素，加入所述工作洗涤液洗涤检测膜条E 1min，倒掉所述工作洗涤液，反复冲洗3次，获得检测膜条F；

(8)显色检测膜条F：将显色底物试剂加入到所述反应槽中，所述显色底物试剂与所述检测膜条F于37℃恒温孵育进行反应，获得检测膜条G；

(9)倒掉所述反应槽内所述显色底物试剂，加入蒸馏水洗涤检测膜条G，倒掉后获得检测膜条H。