[发明专利]一种人纤维蛋白原的制备方法

权利要求书

1.一种人纤维蛋白原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将人血浆低温乙醇沉淀组分I溶解于提取液中，得到组分I溶液；

(2)对步骤(1)得到的组分I溶液进行S/D灭活；

(3)将赖氨酸亲和层析介质用平衡液平衡，然后对步骤(2)得到的溶液进行柱层析，收集穿透峰；

(4)将阳离子交换层析介质用平衡液平衡，然后对步骤(3)得到的穿透峰进行柱层析，层析结束后用淋洗液淋洗层析柱，最后用洗脱液洗脱，收集洗脱峰，得到人纤维蛋白原溶液；

步骤(4)中所述阳离子交换层析介质的孔径为18-80nm，间隔臂为包含3-6个碳原子的烷基链。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述提取液为包含10-20g/L柠檬酸三钠、10-20g/L蔗糖、1.0-2.0g/L三羟甲基氨基甲烷、5-10g/L氯化钠以及盐酸的水溶液，pH为6.5-7.5。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述组分I与提取液的质量体积比为3.5-10g/L。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述溶解的温度为20-25℃。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述溶解是在搅拌下进行。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述搅拌的时间为1-1.5h。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述S/D灭活的操作为：将步骤(1)得到的组分I溶液与S/D溶液混合，在24-26℃下搅拌4-6h。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述S/D溶液为包含90-120g/L聚山梨酯80和30-35g/L磷酸三丁酯的水溶液。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述组分I溶液与S/D溶液的体积比为1:8-12。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述赖氨酸亲和层析介质是以赖氨酸为配基的凝胶。

11.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述赖氨酸亲和层析介质为以赖氨酸为配基的琼脂糖凝胶。

12.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述平衡液为磷酸盐缓冲液。

13.根据权利要求12所述的制备方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的浓度为20-50mM，pH＝6.5-7.5。

14.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)还包括如下操作：在收集穿透峰之后，用淋洗液淋洗层析柱，然后用洗脱液洗脱，收集洗脱峰。

15.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于，所述淋洗液为含0.5-1M氯化钠的磷酸盐缓冲液。

16.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于，所述淋洗液的用量为3-5倍柱体积。

17.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于，所述洗脱液为含0.1-0.3M氨基己酸的磷酸盐缓冲液。

18.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于，所述洗脱液的用量为2-4倍柱体积。