[发明专利]基于增强现实的定点去核方法

说明书

本发明公开了一种基于增强现实的定点去核方法。该方法的特点是通过在荧光显微镜下，统计体外刚成熟的猪卵母细胞极体和细胞核的相对位置关系，计算得到细胞核相对于极体的位置模型。利用增强现实技术在卵母细胞上标记细胞核位置，辅助去核操作。在盲吸法去核过程中，通过标记细胞核的位置来调整注射针针口的位置。解决了盲吸法去核过程中细胞核位置不可见问题，实现了细胞核“可视化”效果。提高了去核成功率以及实验操作的一致性和可重复性。

技术领域

本发明涉及体细胞核移植技术领域。特别是涉及盲吸法定点去核方法。

背景技术

卵母细胞去核是细胞核移植过程中的一个非常重要的步骤，也是核移植成功的关键。去核过程中，细胞核的定位决定了去核是否完全。目前去核的方法主要有：Hoechst染色去核法，化学试剂去核法，挤压法，盲吸法，半卵法，末期去核法，离心去核法等。由于盲吸法不借助其他化学物质，可以减少某些化学物质可能给卵母细胞造成的损伤和其操作简捷、迅速而被普遍采用。盲吸法存在的最大问题是细胞核位置不可见，去核操作时不能保证是否去掉细胞核，操作者只能凭借经验进行去核操作，不同技术熟练度操作人员的去核率存在较大差异，去核操作的一致性与可重复性比较差。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种基于增强现实的定点去核方法，通过荧光下统计体外刚成熟的猪卵母细胞极体和细胞核的相对位置关系，构建细胞核位置模型。应用增强现实技术标记细胞核位置，将细胞核位置“可视化”来辅助去核操作。能够解决盲吸法去核操作中细胞核位置不可见问题，提高去核操作的成功率。

具体技术方案

基于增强现实的定点去核方法，主要包括三部分：1)统计极体与细胞核的相对位置关系；2)构建细胞核位置模型；3)细胞核定位标记。

第1、将卵母细胞染色，在荧光显微镜下，统计极体与细胞核的相对位置关系。包括极体与卵母细胞的位置关系与相角关系。

第2、由极体与细胞核相对位置关系统计数据，构建细胞核位置模型，得到细胞核相对于极体的位置区域。

第3、用标定块标定相机，将细胞核与极体位置的实际值转化为在实际操作时，视觉反馈界面所对应的像素值。在盲吸法去核操作中，根据构建的细胞核位置模型，应用增强现实的方法，通过在极体质心处点击鼠标，显示细胞核的位置区域，根据细胞核的位置来调整注射针斜口的位置，使注射针斜口接近细胞核位置进行去核操作。

本发明的优点和积极效果：

本发明通过统计猪卵母细胞极体和细胞核的相对位置关系，量化了细胞核的分布范围，构建细胞核位置模型。利用计算机视觉反馈，应用增强现实技术，在实验操作中标记细胞核位置，实现细胞核定位效果，解决了盲吸法去核过程中细胞核位置不可见问题，提高了去核成功率以及去核操作的一致性和可重复性。

附图说明

图1为本发明方法的流程框图。

图2为荧光显微镜下极体与细胞核。

图3为细胞核位置模型示意图。

图4为细胞核定位标记图，其中，(a)细胞核定位标记明场图，(b)细胞核定位标记荧光图。其中，黑色弧线代表细胞核内外边缘(相对于极体位置)，白色虚线弧线代表细胞核外边缘标准差。圆弧角度代表极体与细胞核的夹角。

具体实施方式

本实施实例所使用的细胞是从当地屠宰场所取的家猪卵母细胞。卵母细胞的获取方法如下：