[发明专利]一种牙鲆雌核发育四倍体的诱导方法

说明书

本发明提供了一种牙鲆雌核发育四倍体的诱导方法，属于海洋生物育种技术领域。所述诱导方法是将新鲜的真鲷精子进行紫外线照射进行灭活处理；将灭活真鲷精子和新鲜牙鲆卵子进行混合，将得到的精卵混合液与15～19℃的海水混合3min，然后将精卵混合液转移至0～3℃的海水中冷休克处理40～50min；将处理后的精卵混合液培育45～71min，从精卵混合液筛选出浮鱼卵置于压力为550～750kg/cm²的环境中处理5～7min；将静压处理的浮鱼卵进行流水孵化。本发明建立的方法利用冷休克和静水压法对灭活的异源精子所激活的卵子进行染色体加倍处理，实现了所诱导的四倍体只含有母本遗传信息的目标，同时具有较高的诱导率。

技术领域

本发明属于海洋生物育种技术领域，具体涉及一种牙鲆雌核发育四倍体的诱导方法。

背景技术

多倍体育种是鱼类育种的一种重要技术手段。在鱼类中，三倍体普遍具有生长快、不育等特性，可大幅提高单位养殖产量，增加收益。批量化生产商业化养殖所需的三倍体苗种，最简便的方法就是通过四倍体和二倍体亲本之间的交配。因此，四倍体的制备在鱼类多倍体育种中具有重要的意义。

虽然自然界中存在天然四倍体鱼类，但是数量较少，不易得，不能满足鱼苗的应用。传统的鱼类四倍体诱导都是通过精子和卵子正常受精，然后再抑制卵裂从而实现染色体的加倍。这种方法得到的四倍体具有父母本的遗传信息，从而无法对某些只有母本具有的优良性状进行固定。对一些含有特殊性状的雌性个体，如何实现四倍体化，当前技术不能予以解决。

发明内容

有鉴于此，为了获得牙鲆雌核发育四倍体，本发明提供一种牙鲆雌核发育四倍体的诱导方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种牙鲆雌核发育四倍体的诱导方法，包括以下步骤：

1)将新鲜的真鲷精子进行灭活处理，得到灭活的真鲷精子；

2)将所述步骤1)得到的灭活的真鲷精子和新鲜的牙鲆卵子进行混合，将得到的精卵混合液与15～19℃的海水混合；

3)待所述精卵混合液与海水混合3min后，将所述精卵混合物转移至 0～3℃的海水中进行冷休克处理40～50min，得到冷休克处理的精卵混合物；

4)将所述步骤3)中得到的冷休克处理的精卵混合液在15～19℃条件下培育45～71min后，从精卵混合物筛选出上浮鱼卵置于压力为550～750kg/cm²的环境中静压处理5～7min，得到静压处理的鱼卵；

5)将所述步骤4)中得到的静压处理的浮鱼卵进行流水孵化，得到牙鲆雌核发育四倍体。

优选的，所述步骤1)中灭活处理为紫外线照射；所述紫外线照射的时间为40～60s；所述紫外线照射的剂量为55～92mJ/cm²，所述紫外线的功率为 28～32W。

优选的，所述步骤1)中新鲜的牙鲆卵子进行灭活处理前进行稀释；所述稀释用溶液为林格氏液；所述真鲷精子稀释后的密度为4×10⁶～5×10⁶个/ml。

优选的，所述步骤2)中灭活真鲷精子和牙鲆卵子的数量比为1:10～1:20。

优选的，所述步骤2)中精卵混合液和海水的体积比为1:8～12。

优选的，所述步骤4)中处理浮鱼卵的压力环境在30s内达到设定压力；所述静水压处理后，在5s内泄压至标准大气压。

优选的，所述步骤5)中流水孵育的时间70～80h，所述流水孵育的温度为15～16℃。