[发明专利]检测联苯的时间分辨荧光免疫试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种检测联苯的时间荧光分辨荧光免疫分析试剂盒及其检测方法。所述检测联苯的时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒是由多孔包被板、缓冲液、联苯标准品、联苯的抗体冻干品、铕标记的羊抗鼠抗体、洗涤液和增强液所组成。所述检测联苯的时间荧光免疫分析试剂盒的检测方法包括下列步骤：(1)免疫原的制备；(2)包被原的制备；(3)单克隆抗体的制备；(4)样品的前处理及检测。本发明检测时间短、平均回收率高、样品前处理简单、能现场操作检测，应用广泛，检测成本低，同时具有检测特异性强，批内和批间差异小、灵敏度高和操作简单快速，且特别适合于大批量样品的检测等优点。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体的说，涉及一种检测联苯的时间分辨荧光免疫分析试剂盒及其检测方法。

背景技术

食品安全卫生关系到人类的生命和健康，引起了国际社会的广泛关注。随着食品生产自然方式的减少，工业化比重的增加，食品被人们故意或非故意污染的机会正逐渐增加，而且随着国际贸易的日益发达，食品污染扩散的速度之快、范围之广、危害之大，也是前所未有的。现在的果蔬保鲜贮藏技术，主要是依靠适宜的低温和空气调节，但在果蔬贮藏期间它们能够承受的温使用度和气体条件下，控制不住霉菌的生长；另外果蔬保鲜贮藏需要的较高湿度，正式霉菌生长的良好条件，因此在果蔬保鲜中使用防腐剂是必不可少的。防腐剂不但对果蔬保鲜有利，而且它也可控制产生霉菌，从而使人们免受霉菌毒素的侵害。

防腐剂的使用对食品贮藏具有重要意义。但在食品中使用化学品难免让人们担心，防腐剂能杀菌，同时对人体也有害处。人们对于在食品中使用化学品，尤其是使用防腐剂很担心，但在实际上不使用又不行，防腐剂成了一把双刃剑。为此，有关专家提出几点建议，其中一点要严格执行GB2760中规定的最高使用限量和最高残留限量，选择合适的剂量，最大限度地提高药效，从而减少使用量，将污染降至最低水平。这就需要发展相应的检测方法，快速、准确的检测出果蔬中残留的防腐剂，给消费者提供最大限度的博阿胡。防腐剂在实际应用时，由于微生物种类的多样性和防腐剂作用的特点，人们致力加强复配技术的开发和应用，采用多种保鲜剂的混合应用。因此，需要发展同时测定果蔬中多种保鲜剂的分析方法，提高分析时间和材料方面效率。

联苯在世界各国广泛使用，防止水果在生长、储存、运输过程中腐烂变质。但水果中残留的防腐剂对人体具有一定的毒性，主要侵害人体的肝肾、神经系统和骨髓。有文献报道联苯有显著的细胞毒性。

而时间分辨荧光免疫分析法（TR-FIA）由于其特异性强、灵敏度高、操作简单、廉价，且特别适于大批量样品的检测等优点而越来越被人们所重视和采用。目前还没有针对联苯检测的时间荧光免疫分析法的专利和文献报道。

发明内容

为解决以上技术问题，本发明的目的在于提供一种苹果中联苯残留的检测时间分辨荧光免疫分析试剂盒。

本发明的目的之二在于提供一种快速简便地检测苹果中联苯的时间分辨荧光免疫分析试剂盒的检测方法，用于定量或定性地检测苹果中联苯残留量。

本发明目的之一是这样实现的：检测联苯的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其关键在于由多孔包被板、缓冲液、联苯标准品溶液、抗联苯的抗体冻干品、铕标记的兔抗鼠抗体、洗涤液和增强液体所组成。

本发明目的之二是这样实现的：检测联苯的时间分辨荧光免疫分析试剂盒的检测方法，包括免疫原、包被原和单克隆抗体的制备以及样品前处理及检测，其关键在于：

(1)免疫原的制备：将半抗原联苯与牛血清白蛋白（BSA）偶联，得到免疫原（联苯-BSA）；

(2)包被原的制备：将半抗原联苯与卵血清白蛋白（OVA）偶联，得到包被原（联苯-OVA）；

(3)单克隆抗体的制备：

a.用步骤(1)的免疫原（联苯-BSA）免疫小鼠，通过杂交瘤技术，得到分泌抗联苯的单克隆抗体的杂交瘤细胞株；