[发明专利]一种维生素K2含量的检测方法

说明书

本发明公开了一种维生素K2含量的检测方法，其解决现有维生素K2检测方法存在应用单一、保留时间较长、色谱条件较复杂的问题。其经过以下步骤：（1）从待测样品中提取维生素K2；（2）待测样品高效液相分析；（3）标准样品溶液的制备；（4）标准曲线建立；（5）浓度获取。本发明采用N，N‑二甲基甲酰胺及异丙醇做提取剂可以方便地提取待测样品中的维生素K2，并采用甲醇与无水乙醇的混合溶剂做流动相能够快速有效地分离待测样品溶液中的维生素K2。本发明的含量测定方法操作便捷，检测效率高，准确度高，各试剂易得且毒性低。

技术领域

本发明涉及利用吸附作用，例如色谱法将材料分离成各个组分来测试材料，尤其是在保健食品、药品、预混料中测量维生素K2含量的检测方法。

背景技术

维生素K2是一种脂溶性维生素，具有叶绿醌生物活性的萘醌基团的衍生物，也被称为甲萘醌，其结构是由二甲基-1，4-萘醌母核及C-3位上数目不等的异戊二烯侧链组成，根据其单元个数差异，维生素K2共分为14种，以维生素K2（MK-5），K2（MK-7）最为重要。维生素K2具有治疗和预防骨质疏松症、增加骨密度，预防肝癌，促进凝血，利尿，降血压等药理活性。

维生素K2易溶于有机溶剂，正己烷、异丙醇等。其遇碱和见光不稳定，而耐热、耐酸。维生素K2技术上常采用包衣技术增加稳定性。目前，已公开的维生素K2的检测方法比较单一，且保留时间较长，色谱条件较复杂。因此，为控制维生素K2相关产品质量，需要建立更高效便捷的检测方法。

发明内容

为了克服现有维生素K2检测方法存在应用单一、保留时间较长、色谱条件较复杂的不足，本发明的目的在于提供一种操作便捷、检测效率高、应用范围广的维生素K2含量的检测方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种维生素K2含量的检测方法，其特征在于：其经过以下步骤：

（1）称取待测样品并且置于棕色容量瓶中，加入10mL N,N—二甲基甲酰胺，涡旋震荡分散均匀后，加入25mL异丙醇，震荡至均匀后，超声15-30min，冷却至室温，用异丙醇定容至刻度，摇匀，得待测样品溶液；

（2）将步骤1的待测样品溶液进行高效液相色谱分析，其条件为：色谱柱为C18的反相柱，直径为4-5 mm，长度为25mm，填料粒径为5微米；流动相包含60-80重量份的乙醇和40-20重量份的甲醇；流动相流速为0.8-1.2 mL/min；柱温为25-35摄氏度；进样量为5-20微升；使用紫外可见248nm下进行检测；

（3）配制标准样品溶液：称取维生素K2标准样品，制成1.0ug/mL、2.0ug/mL、5ug/mL、10ug/mL、20.0ug/mL的标准样品溶液；

（4）建立标准曲线：将步骤3得到的标准样品溶液在步骤2的条件下进行高效液相分析，并且统计其色谱峰的面积，并且以峰面积为纵坐标，已知浓度为横坐标，建立一元一次标准曲线；

（5）将步骤2中相应位置的峰面积与标准曲线进行对比，得到其浓度。

在本发明优选的方面，所述的方法经过以下步骤：

（1）称取待测样品并且置于棕色容量瓶中，加入10mL N,N-二甲基甲酰胺，涡旋震荡分散均匀后，加入25mL异丙醇，震荡至均匀后，超声22 min，冷却至室温，用异丙醇定容至刻度，摇匀，得待测样品溶液；

（2）将步骤1的待测样品溶液进行高效液相色谱分析，其条件为：色谱柱为4.6×250mm 的C18的反相柱，填料粒径为5微米；流动相包含70重量份的乙醇和30重量份的甲醇；流动相流速为1.0 mL/min，柱温为30摄氏度；进样量为10微升；使用紫外可见248nm下进行检测；

（3）配制标准样品溶液：维生素K2标准样品，制成1.0ug/mL、2.0ug/mL、5ug/mL、10ug/mL、20.0ug/mL的标准样品溶液；