[发明专利]一种维生素K2含量的检测方法

权利要求书

1.一种维生素K2含量的检测方法，其特征在于：其经过以下步骤：

（1）称取待测样品并且置于棕色容量瓶中，加入10mL N,N—二甲基甲酰胺，涡旋震荡分散均匀后，加入25mL异丙醇，震荡至均匀后，超声15-30min，冷却至室温，用异丙醇定容至刻度，摇匀，得待测样品溶液；

（2）将步骤1的待测样品溶液进行高效液相色谱分析，其条件为：色谱柱为C18的反相柱，直径为4-5 mm，长度为25mm，填料粒径为5微米；流动相包含60-80重量份的乙醇和40-20重量份的甲醇；流动相流速为0.8-1.2 mL/min；柱温为25-35摄氏度；进样量为5-20微升；使用紫外可见248nm下进行检测；

（3）配制标准样品溶液：称取维生素K2标准样品，制成1.0ug/mL、2.0ug/mL、5ug/mL、10ug/mL、20.0ug/mL的标准样品溶液；

（4）建立标准曲线：将步骤3得到的标准样品溶液在步骤2的条件下进行高效液相分析，并且统计其色谱峰的面积，并且以峰面积为纵坐标，已知浓度为横坐标，建立一元一次标准曲线；

（5）将步骤2中相应位置的峰面积与标准曲线进行对比，得到其浓度；

所述的步骤1中，异丙醇和N,N-二甲基甲酰胺使用分子筛进行除水，并且在使用前均使用氮气鼓泡30-50秒。

2.根据权利要求1所述的一种维生素K2含量的检测方法，其特征在于：所述的方法经过以下步骤：

（1）称取待测样品并且置于棕色容量瓶中，加入10mL N,N-二甲基甲酰胺，涡旋震荡分散均匀后，加入25mL异丙醇，震荡至均匀后，超声22 min，冷却至室温，用异丙醇定容至刻度，摇匀，得待测样品溶液；

（2）将步骤1的待测样品溶液进行高效液相色谱分析，其条件为：色谱柱为4.6×250mm的C18的反相柱，填料粒径为5微米；流动相包含70重量份的乙醇和30重量份的甲醇；流动相流速为1.0 mL/min，柱温为30摄氏度；进样量为10微升；使用紫外可见248nm下进行检测；

（3）配制标准样品溶液：维生素K2标准样品，制成1.0ug/mL、2.0ug/mL、5ug/mL、10ug/mL、20.0ug/mL的标准样品溶液；

（4）建立标准曲线：将步骤3得到的标准样品溶液在步骤2的条件下进行高效液相色谱分析，并且统计其色谱峰的面积，并且以峰面积为纵坐标，已知浓度为横坐标，建立一元一次标准曲线；

（5）将步骤2中相应位置的峰面积与标准曲线进行对比，得到待测样品溶液中维生素K2的浓度，并且计算待测样品中维生素K2浓度。

3.根据权利要求1所述的一种维生素K2含量的检测方法，其特征在于：所述的步骤1中，超声的频率是45kHz，超声功率为1kW。

4.根据权利要求1所述的一种维生素K2含量的检测方法，其特征在于：所述的步骤2中，所述的流动相包含70重量份的乙醇、30重量份的甲醇和0.15重量份的三氟乙酸。

5.根据权利要求1所述的一种维生素K2含量的检测方法，其特征在于：在步骤5中，所述的维生素K2含量按照下式来计算：

式中， C：由液相色谱仪计算得到的待测样品浓度，ug/mL；

50：待测样品稀释体积，mL；

m：待测样品称样量，g；

1000：浓度转化系数。