[发明专利]蛇胆汁的超高效液相色谱-串联质谱鉴别方法

说明书

本发明公开了一种蛇胆汁的超高效液相色谱‑串联质谱(HPLC‑MS/MS)鉴别方法，采用HPLC‑MS/MS方法，建立了蛇胆汁专属性鉴别方法。取样品直接稀释后进行质谱分析，在多反应监测模式(MRM)下进行检测，根据蛇胆汁特征成分判定是否含有蛇胆汁。HPLC‑MS/MS方法快速、灵敏，能准确鉴别样品中是否含有蛇胆汁，拟建立蛇胆汁高专属性、重复性的质量控制方法。

技术领域

本发明涉及中成药药材的鉴别技术领域，具体是蛇胆汁的超高效液相色谱-串联质谱鉴别方法。

背景技术

蛇胆汁具有化痰镇痉、清热解毒、清肝明目之效，用于痰迷心窍、风热发狂、痰多咳嗽、眼雾不明、痔疮红肿、皮肤热毒、痱子，为常用中成药蛇胆川贝液、蛇连川贝散、牛黄蛇胆川贝液（胶囊、滴丸）等的主要原料。由于蛇胆汁具有独特的药用价值，加上市场需求量大、自然资源递减、价格昂贵，已有报道的掺假物有鸡、鸭、鱼、猪、牛等动物胆汁和淀粉糊、青菜汁、明胶液、色素以及熟地黄提取液等，以及油胆（用机油刺激蛇鼻腔或蛇提，使胆汁增多而质差）或蜜胆，或将蛇胆多次浸泡，再把蛇胆与酒液分别出售使胆汁稀薄质差。现行地方标准均以牛磺胆酸钠为鉴别特征鉴别蛇胆汁，但其它动物胆汁如牛、羊、鸡、狗和猪胆汁中牛磺胆酸钠含量均较高，鉴别方法不具专属性。因此，如何有效而正确的鉴别蛇胆汁，为保障人民的用药安全及产品的质量可控，有着重要意义。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明提供了蛇胆汁的超高效液相色谱-串联质谱鉴别方法。该鉴别方法快速、灵敏，能准确鉴别样品中是否含有蛇胆汁。

本发明的技术方案概述如下：

（1）样品收集：分别收集原蛇胆汁（活蛇取胆，用50%乙醇1:1浸泡）、生产企业投料的蛇胆汁及鸡、鸭、牛、羊、猪和狗等其他动物胆汁；

（2）对原蛇胆汁进行物质基础研究并对原蛇胆汁及其它动物胆汁的特征成分进行确证；

（3）对照药材溶液的制备: 取蛇胆汁对照药材约10mg，精密称定，加50%甲醇10mL，超声处理（功率320W，频率40kHz）10min，过0.22μm滤膜，即得；

（4）原蛇胆汁及其它动物胆汁的制备：分别取各个样品，混匀，精密吸取50μL，置2mL离心管中，精密加入50%甲醇950μL，摇匀，过0.22μm滤膜，即得；

（5）液相条件：色谱柱：EcLipse PLus C₁₈柱（1.8µm，2.1mm×100mm），柱温35℃，流速0.3mL/min，以甲醇-10mmoL/L乙酸铵溶液体系，进行梯度洗脱，通过调整梯度，发现表1的梯度条件进行洗脱，所有同分异构体均能达到基线分离（因TSCA和TSDCA暂无对照品，故以蛇胆汁对照药材进行优化）效果较好；

表1 梯度洗脱表

（6）质谱条件：采用电喷雾电离源（ESI），负离子方式扫描，MRM方式检测；干燥气温度：200℃；干燥气流速：12L/min；雾化气压力：20（psi）；鞘流气温度：350℃；鞘流气流速：11L/min；离子漏斗参数：高压150V，低压60V；毛细管电压：3KV；喷嘴电压：1000V；

（7）样品测定：分别精密吸取上述混合对照品溶液、蛇胆汁对照药材溶液、各种原蛇胆汁溶液、其它动物胆汁溶液1μL，进样分析。

所述对照物质：蛇胆汁对照药材，中检院提供，批号：120938-200705，每瓶装60mg，相当于蛇胆汁5mg；

试剂：甲醇、乙酸铵、乙腈均为色谱纯。 本发明的有益效果是：