[发明专利]一种发状念珠藻的培养方法

说明书

本发明属于藻类培养技术领域，尤其涉及一种发状念珠藻的培养方法。该方法包括使用平板分离法对野外采集的发状念珠藻分离纯化，得到藻种接种于培养基中得到接种藻体，将接种藻体接种到固体培养基中，保持手术固体培养基湿润，培养得到移植藻体，所述固体培养基中包括以下质量份数的原料：腐殖酸土100‑150份、硅酸盐分子筛1‑5份、藻酸盐0.2‑0.7份、K₂HPO₄ 1‑5份、柠檬酸铁铵0.5‑1份、脂肪醇0.5‑1份和水500‑800份；将移植藻体连同固体培养基转移到土壤中，培养即可得发状念珠藻。本发明提供的方法适用于在土壤贫瘠的地区大量栽培发状念珠藻，起到固氮作用，改善土壤结构。

技术领域

本发明属于藻类培养技术领域，尤其涉及一种发状念珠藻的培养方法。

背景技术

发状念珠藻是一种主要分布于我国西部的陆生固氮蓝藻，俗称发菜，是国家I级重点保护野生植物。由于发状念珠藻能用无机碳和无机氮合成有机碳和有机氮，对改良荒漠土壤，繁衍其他生物有重要意义。发菜被誉为“开发荒漠的先锋”。由于发菜产地通常相当贫穷，有农民以采挖发菜卖钱谋生。但由于多年来过量采挖发菜，其野生资源已被严重破坏，并导致大片草场退化和土地荒漠化。发菜的分布范围也随着土地的开发而大量减少。

为了能使发状念珠藻资源得以恢复，保护资源和环境，有关发状念珠藻的大规模栽培一直受到关注。由于我们西部土壤贫瘠，沙性大，结构松散，发状念珠藻在这种环境下生长缓慢。因此，先将发状念珠藻细胞在培养基中培养，得到发状念珠藻菌体；再将发状念珠藻菌体接种于土壤中。但是培养基中发状念珠藻的增殖速度较慢，而且已发生染菌现象，影响发状念珠藻的大规模栽培。

发明内容

针对发状念珠藻增殖速度缓慢，难以大规模栽培的问题，本发明提供一种发状念珠藻的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）使用平板分离法对野外采集的发状念珠藻经分离纯化，得到藻种；

（2）将所述藻种接种于液体培养基中，在光照培养箱中培养得到接种藻体，其中，所述液体培养基包括BG11培养基；

（3）将所述接种藻体接种到固体培养基中，在室外定期补充水分保持固体培养基湿润，培养得到移植藻体，所述固体培养基中包括以下质量份数的原料：腐殖酸土100-150份、硅酸盐分子筛1-5份、藻酸盐0.2-0.7份、K₂HPO₄ 1-5份、柠檬酸铁铵0.5-1份、脂肪醇0.5-1份和水500-800份；

（4）将所述移植藻体连同所述固体培养基转移到土壤中，定期浇水，培养即可得到成片的发状念珠藻。

本发明的另一目的是，提高液体培养基与固体培养基的相互作用，进而促进藻体的生长，步骤（2）中，所述液体培养基包括以下质量份数的原料：BG11培养基 70-90份、5-氨基乙酰丙酸0.05-0.1份和肌醇0.1-0.5份。

本发明的再一目的是，增强藻体细胞的生长活力，提高藻体在固体培养基中的生长速率，步骤（3）中，所述固体培养基还包括以下质量份数的原料：谷氨酰胺0.1-0.5份。

具体地，步骤（1）包括：（1）将野外采集的发状念珠藻稀释，得到稀释藻液；（2）将所述稀释藻液喷射在平板培养基上进行扩大培养，在室温、光照强度50-80μmol/（m²·s¹）及光暗周期10/14下，扩大培养8-12天所得到的发状念珠藻细胞培养物作为藻种。

具体地，步骤（2）中，所述藻种的培养条件是：室温、光照强度30-50μmol/（m²·s¹）和光暗周期12/12；所述藻种在培养过程中，根据液体培养基的消耗，及时补充，并调整液体培养基的pH维持在6.5-7.5。