[发明专利]犬冠状病毒抗体快速定量检测卡及使用方法

权利要求书

1.一种犬冠状病毒抗体快速定量检测卡，包括检测卡外壳和装配在检测卡外壳内的试纸条，所述试纸条包括带压敏胶的塑料底板，在底板上依次粘贴样品垫、标记物垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述标记物垫由载体基层和标记物组成，标记物为载体基层上喷涂镧系荧光检测微球和镧系荧光质控微球形成的一层膜，其特征在于：所述硝酸纤维素膜上包被犬冠状病毒重组抗原为检测线，包被兔抗鸡lgY抗体为质控线，标记物为标记有犬冠状病毒结构蛋白S的重组抗原的荧光检测微球和标记鸡lgY抗体的荧光质控微球。

2.根据权利要求1所述的犬冠状病毒抗体快速定量检测卡，其特征在于：所述犬冠状病毒结构蛋白是犬冠状病毒结构蛋白S蛋白，其为多表位表达的重组蛋白。

3.根据权利要求1所述的犬冠状病毒抗体快速定量检测卡，其特征在于：所述硝酸纤维素膜上质控线采用的兔抗鸡lgY抗体为兔抗鸡lgY的lgG。

4.一种制备权利要求2中所述犬冠状病毒结构蛋白S的方法，其特征在于：采用生物信息学技术（Bioinformatics）对犬冠状病毒不同亚型毒株的S基因进行比对，确认犬冠状病毒S蛋白基因序列，设计一对引物，经PCR扩增出目的S基因，将S基因连接到真核表达载体pEGFP-C1上，构建出重组质粒pEGFP-S，之后进行双酶切鉴定，利用Lipofecta mine 2000（脂质体2000转染试剂）转染试剂盒将重组质粒转染到猪肾细胞PK-15中，通过G418筛选后，在荧光显微镜下仍能观察到部分细胞能够呈现出绿色荧光，这表明重组融合蛋白pEGFP-S在PK-15细胞中得到了表达，将能够表达重组融合蛋白的细胞克隆，进一步大量表达并纯化犬冠状病毒结构蛋白S蛋白。

5.一种制备权利要求2中所述犬冠状病毒结构蛋白S的方法，其特征在于：采用生物信息学技术原理，应用计算机对犬冠状病毒的结构蛋白S抗原基因进行比对分析，及抗原表位预测，筛选和设计犬冠状病毒特异性的抗原肽序列，并进行人工化学合成抗原肽。

6.一种权利要求1或2或3或4所述检测卡的使用方法，其特征在于： 所述检测卡为定量层析检测卡，将含有犬冠状病毒抗体的待测液滴入检测卡的加样孔中，层析15分钟，然后使用层析扫描仪对检测卡进行扫描，层析扫描仪将扫描所得数据无线传输给客户端，客户端根据扫描数据计算得出检测卡上质控线和检测线的荧光信号强度值，同时客户端从云平台获得被检测犬冠状病毒抗体的标准曲线，客户端根据标准曲线与质控线和检测线的荧光信号强度值的对照关系计算得出待测液中犬冠状病毒抗体的含量。

7.根据权利要求6所述的使用方法，其特征在于：所述标准曲线是通过如下方式导入云平台的，首先制备一批检测卡，并配制对应的犬冠状病毒抗体标准品，用检测卡层析标准品并用层析扫描仪检测，层析扫描仪将检测得到的数据处理传递给客户端，客户端计算得出标准品对应的检测线和质控线的荧光信号强度值，并根据此数据进行回归从而得到犬冠状病毒抗体的标准曲线，客户端将标准曲线传输至云平台储存。

8.根据权利要求7所述的使用方法，其特征在于：所述客户端计算得出的标准曲线形成一个文件，并对应生成条形码，客户端通过扫描条形码可以从云平台提取该标准曲线。