[发明专利]一种基于明月草的黄酮的提取方法

说明书

技术领域

本发明属于农业生产加工领域，涉及一种基于明月草的黄酮的提取方法。

背景技术

明月草为菊科三七属植物，又名白子菜、白东枫、玉枇杷、三百棒、厚面皮、鸡菜、大肥牛、白番苋等，分布于台湾至华南、西南一代，喜生于潮湿的阴地上。其根茎肥大、肉质，呈团块状，径2-3cm，新鲜时灰黄色，侧生茎芽多枚。

明月草全省均可入药，其味辛、淡；性平，具有清热、舒筋、止血、祛瘀等功效，能够治疗百日咳、风湿痛、骨折、创伤出血、降血糖、肺结核等功能。现代研究表明，其具有的药用和保健功能，与其含有的丰富总黄酮类具有密切的关系。黄酮类属于植物次生代写产物，是多种中药发挥生理作用的物质基础。目前，黄酮获得研究较多，一般均是从植物提取角度着手，比如溶剂提取。常规溶剂提取法具有提取率低、提取杂质多等问题。针对明月草特异的黄酮的提取方法，目前研究较为单一，不能很好地在降低成本、提高效率的基础上，最大程度获得高纯度黄酮。

发明内容

本发明的目的是提供一种提高明月草总黄酮获得率，解决目前明月草的黄酮获得过程效率不高、纯度较低等问题。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供一种基于明月草的黄酮的提取方法，该方法包括如下步骤：

(1)组织培养：取明月草叶片作为外植体，在无菌操作条件下，以叶片背面接于改良MS诱导培养基中，诱导分化得到愈伤组织，其中，改良MS诱导培养基添加有1.5-2.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)，0.1-0.3mg/L的萘乙酸(NAA),1.3-1.7mg/L的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，pH5.5-6；暗培养8-10天后，转入光照强度为1000-1500Lx培养室中，保持湿度80-85％，培养8-10天；继代培养2-3代后转接于分化培养基中，其中，分化培养基为0.2-0.4mg/L的萘乙酸、2-5％质量分数蔗糖的1/2MS培养基；1500-2000Lx光照强度下，培养20-30天，获得试管苗；

(2)水培：将试管苗接种于水培液中，其中，添加有40-45mg/L的MnSO₄、6.0-7.0mg/L的ZnSO₄；自然光下，培养8-10天，获得明月草幼苗；

(3)大棚种植：按照草炭：蛭石：细砂按体积比(3-5):(0.5-1.5):(0.5-1.5)配制混合培养基；将明月草幼苗种植于混合培养基中，自然光下，培养5-8天后，按照1500-2000kg/亩施入腐熟有机肥；4-5个月后收获明月草茎叶；适时通风、灌溉；

(4)总黄酮提取：将明月草茎叶自然风干，剪切茎叶至2-3mm小块，粉碎过20-30目筛；按照料液比1:30-1:40比例添加50％-60％体积分数乙醇，浸泡90-120min，获得黄酮浸膏。

上述提高明月草总黄酮获得率的方法，其中，水培液中添加(20-25)：(75-80)的Ca(NO₃)₂和(NH₄)SO₄，总氮素水平为3-4mmol/L。

上述提高白背明月草总黄酮获得率的方法，其中，水培液中添加28-32g/L的蔗糖作为碳源。

所述提高明月草总黄酮获得率的方法，其中，明月草每年大棚种植时间为5月和10月，10月和次年5月收割。

上述的一种基于明月草的黄酮的提取方法，其中，步骤(4)之后，将黄酮浸膏以及浸渣一起放置于循环回流装置中进行回流提取，60-70℃条件下，回流提取3-4次，每次60-90min。

上述的一种基于明月草的黄酮的提取方法，其中，在回流提取次数间隔之间，将浸膏和浸渣放置于功率为360-480W微波下浸提1.5-2.5min；随后，将浸膏连同料渣一起进入下一次回流提取过程。

上述的一种基于明月草的黄酮的提取方法，其中，浸提结束后，将浸膏减压浓缩30-40min；采用聚酰胺树脂动态吸附浓缩液进行纯化，其中，洗脱液为70-75％乙醇，洗脱时间为2-4BV/h。

上述一种基于明月草的黄酮的提取方法，其中，聚酰胺树脂纯化过程中，树脂药材比为1.5:1-2:1；树脂径高比为1:8-1:10。

上述一种基于明月草的黄酮的提取方法，其中，上样pH保持为2.9-3.1；清洗pH保持为2-4。

与现有技术相比，本发明的一种基于明月草的黄酮的提取方法具有如下优点：