[发明专利]一种MA104细胞制备人用轮状病毒活疫苗的冻干工艺方法在审

申请号：	201711040924.4	申请日：	2017-10-31
公开（公告）号：	CN107744504A	公开（公告）日：	2018-03-02
发明（设计）人：	樊可	申请（专利权）人：	山东亦度生物技术有限公司
主分类号：	A61K9/19	分类号：	A61K9/19;A61K39/15;A61K47/10;A61K47/26;A61K47/42;A61P31/14
代理公司：	山东济南齐鲁科技专利事务所有限公司37108	代理人：	郑向群
地址：	257091 山东省东营市***	国省代码：	山东;37
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摘要：
搜索关键词：	一种 ma104 细胞制备轮状病毒疫苗工艺方法
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【说明书】：

技术领域

本发明涉及人用疫苗研发技术领域，尤其是涉及一种MA104细胞制备人用轮状病毒活疫苗的冻干工艺方法。

背景技术

轮状病毒是导致婴幼儿秋冬季腹泻的主要病原。几乎所有儿童在5岁以前都受到过轮状病毒感染，全球每年约有1.11亿-1.35亿例轮状病毒腹泻病例，导致约65万名婴儿死亡。然而轮状病毒感染无特效治疗药物，疫苗是首选预防和控制轮状病毒感染的手段。

轮状病毒在一般组织培养中不适应，需选用特殊的细胞株MA104株（恒河猴胚肾细胞）培养，但是存在以下问题：首先，MA104细胞培养轮状病毒制成的原液未经纯化步骤，其中含有部分细胞碎片、杂蛋白、盐等不可控物质，所以使用常规冻干工艺完成的制品存在塌陷、硬壳、萎缩及挂壁等问题；其次，国内市场上该类疫苗仅有一种，为兰州生物制品研究所有限责任公司生产的罗特威，而该疫苗为液体口服苗，在长期保存及运输方面存在局限性，因此为提高产品的市场使用率，研究开发一种有效的冻干工艺方法进行该类疫苗的冻干是亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于为解决现有技术的不足，而提供一种MA104细胞制备人用轮状病毒活疫苗的冻干工艺方法。

本发明新的技术方案是：一种MA104细胞制备人用轮状病毒活疫苗的冻干工艺方法，所述的工艺步骤为：

1）未经纯化的轮状病毒疫苗原液与赋形剂、保护剂混合后制成半成品，开始预冻；

2）将预罐装有半成品的西林瓶，规格为0.5ml/支，放置于冻干机的搁板之上，选择有代表性的西林瓶，放入温度探头及共晶点检测探头，进行预冻：以2℃/min的速度，使用12.5min的时长从25℃降温至0℃，并维持60min；以1℃/min的速度，使用10min的时长从0℃降温至-20℃，并维持60min；以1℃/min的速度，使用10min的时长从-20℃降温至-40℃，并维持120min；

3）使用30min的时长将冻干机内的真空度降至0.1mbar，实际真空度维持在0.15mbar～0.2mbar之间；

4）真空度恒定后，搁板分四个阶段升温分别为-40℃升温至-35℃，-35℃升温至-25℃，-25℃升温至-15℃，-15℃升温至-5℃；

5）进一步抽真空，使用30min的时长将冻干机内的真空度由0.1mbar降至0.01mbar，同时搁板由-5℃升温至5℃；

6）随后60min内将温度升至15℃～25℃之间，维持200min～400min，真空状态下压盖出仓后得到最终制品，外观、溶解时间、水分、滴度均达到要求。

所述d的赋形剂不含明胶，质量百分比浓度为：6%～8%的甘露醇，1%～3%的右旋糖酐。

所述的保护剂的质量百分比浓度为：2%～3%的谷氨酸钠，2%～3.5%的组氨酸及0.01%～1%的人血白蛋白。

所述的赋形剂、保护剂根据要求的浓度，分别计算并称取制成母液所需的甘露醇，右旋糖酐，谷氨酸钠，组氨酸，溶解于一定体积的注射用水中，其中甘露醇和右旋糖酐需37℃温水浴，待完全溶解并冷却至室温定容后，0.22µm微孔滤膜过滤除菌制成母液。

所述的保护剂人血白蛋白根据需要浓度直接加至病毒原液中。

所述的最终制品外观为疏松体；水分含量为1.50%（质量百分比）；溶解时间为12s，无塌陷、萎缩及挂壁现象。

本发明的有益效果是：改善MA104细胞培养制备的人用轮状病毒活疫苗的稳定性，以利于其长期保存和运输。原料易得，不存在塌陷、萎缩、硬壳及挂壁问题。

附图说明

图1为本发明的工艺步骤。