[发明专利]一种β‑胶原特殊序列的化学发光检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，具体涉及一种β-胶原特殊序列的化学发光检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

I 型胶原是人体最丰富的胶原蛋白形式，是骨中唯一的胶原成分，占骨基质的90%以上。在骨组织骨基质的不断重建中，I型胶原被降解，小片段释放入血，部分出现于尿液中。 测定血、尿中这些小片段的含量和变化可评价骨吸收状态，既有助于代谢性骨病的诊断，也能监测和评价抗骨吸收药物的疗效。

β-胶原特殊序列（β-crosslaps），又称为I型胶原C末端肽 ( C-terminal telopeptides of type I collagen，CTX )。β-Crosslaps存在于成熟的骨胶原中，是成熟Ⅰ型胶原蛋白的羧基端降解代谢产物，同时也被分解成降解产物释放入血，是敏感性相对较好的一个指标，也是骨再吸收的重要标志物，通过检测β-Crosslaps可用于监测骨质疏松症的抗吸收治疗以及了解骨转换的程度。当人体骨吸收速度加快时，I型胶原蛋白的降解速度也随之加快，分解的β-crosslaps在血液中的含量相应增加。因β-crosslaps能在一定程度上反映骨转化的情况，临床上常将β-crosslaps作为一项重要的骨吸收标志物。

目前用于检测β-胶原特殊序列的方法主要有放射免疫法、酶联免疫分析法、化学发光免疫分析法等。放射免疫法操作步骤较多，需要特殊的检测设备，且会对操作人员的健康产生极大的危害；酶联免疫分析法一种非均相免疫测定方法，即抗原、抗体反应在固液相间进行，反应平衡后需要进行两相分离，操作过程难以实现全自动化，且存在灵敏度低、检测时间长等的缺点。CN 106248970 A（2016.12）公开了一种测定I型胶原C末端肽含量的试剂盒及其检测方法，该试剂盒采用碱性磷酸酶标记I型胶原C末端肽抗体，采用碱性磷酸酶进行标记的缺点是酶促受环境影响大：如消毒液、酸碱度、离子都会对其造成影响，稳定性较弱，从而影响测定结果。因此，建立一种有效、快速、简单、灵敏、抗干扰性高的检测β-胶原特殊序列的方法具有十分重要的意义。

本发明以磁分离化学发光技术为检测手段，同时结合吖啶酯标记技术进行检测。

吖啶取代物作为化学发光标记物用于免疫分析具有许多优越性，主要有：①化学反应简单、快速、无需催化剂，在有H₂O₂的稀碱性溶液中即能发光；②背景发光低，信噪比高，发光反应干扰因素少；③发光类型为闪光型发光，光释放快速集中、发光效率高、发光强度大；④吖啶酯分子量小，避免遮蔽抗体结合位点，可提高系统整体灵敏度；⑤易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少；⑥标记物稳定，不受环境氧化剂的影响，在2-8℃下可保存数月之久。因此吖啶取代物是一类非常有效的化学发光标记物。

磁分离免疫检测技术是一种以磁性微粒为固相分离载体而建立的一种新型免疫检测方法，该方法可使抗原、抗体的结合反应在近似液相的条件下进行，因而反应快速、彻底。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种操作简便、灵敏度更高、反应快速、稳定、准确地定量测定β-胶原特殊序列的磁微粒化学发光测定试剂盒及制备方法。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

一种β-胶原特殊序列的化学发光试剂盒及其制备方法，本发明所提供的甲状腺球蛋白的化学发光试剂盒，采用磁微粒偶联β-胶原特殊序列捕获抗体、吖啶酯标记的β-胶原特殊序列检测抗体。试剂盒还包括β-胶原特殊序列校准品溶液、化学发光预激发液A以及化学发光激发液B以及清洗液。

作为本发明进一步的方案，所述磁微粒的内核为四氧化三铁或三氧化二铁，磁微粒的表面修饰基团为一种或多种活性功能基团，包括但不限于羧基、氨基、对甲苯磺酰基或链霉亲和素-生物素。

作为本发明进一步的方案，所述的磁微粒可直接与β-胶原特殊序列捕获抗体偶联，或将磁微粒与链霉亲和素偶联，同时采用生物素标记β-胶原特殊序列捕获抗体。

作为本发明进一步的方案，所述的化学发光标记物为吖啶酯，如NSP-DMAE-NHS、NSP-SA-NHS等。

作为本发明进一步的方案，所述的吖啶酯标记的是β-胶原特殊序列检测抗体。

作为本发明进一步的方案，所述的吖啶酯与吖啶酯标记的β-胶原特殊序列检测抗体的摩尔比为5-100:1。